一．实验目的：尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质
二．实验原理：某些化学试剂能使生物组织中的有关有机化合物,产生特定的颜色反应.
1．可溶性还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖）与斐林试剂发生作用,可生成砖红色的Cu 2O沉淀.即Cu ( OH ) 2被还原成Cu 2O,葡萄糖被氧化成葡萄糖酸.
2．脂肪可以被苏丹Ⅲ染液染成橘黄色（或被苏丹Ⅳ染液染成红色）.
3．蛋白质与双缩脲试剂发生作用,产生紫色反应.（蛋白质分子中含有很多肽键,在碱性NaOH溶液中能与双缩脲试剂中的Cu2+作用,产生紫色反应.）
4.淀粉遇碘变蓝色.
三．实验材料
1．做可溶性还原性糖鉴定实验,应选含糖高,颜色为白色的植物组织,如苹果、梨.（因为组织的颜色较浅,易于观察.）
2．做脂肪的鉴定实验.应选富含脂肪的种子,以花生种子为最好,实验前一般要浸泡3-4小时（也可用蓖麻种子）.
3．做蛋白质的鉴定实验,可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清.
四、实验试剂
斐林试剂（包括甲液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和乙液：质量浓度为0.05g/ mL CuSO4溶液）、苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液、双缩脲试剂（包括A液：质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和B液：质量浓度为0.01g/ mL CuSO4溶液）、体积分数为50%的酒精溶液,碘液、蒸馏水.
五、方法步骤：
（一） 可溶性糖的鉴定
1.制备组织样液.
苹果或梨组织液必须临时制备，因苹果多酚氧化酶含量高,组织液很易被氧化成褐色,将产生的颜色掩盖.
2.注入2mL组织样液.
3.注入1mL新制的斐林试剂,振荡.
（现配现用、先混后加）
应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存,使用前才将甲、
乙液等量混匀成斐林试剂；切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测.
斐林试剂很不稳定,甲、乙液混合保存时,生成的Cu ( OH ) 2在70-900C下分解成黑色CuO和水；甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应,无
Cu ( OH ) 2生成.
4.水浴加热：试管放在盛有50-650C温水的大烧杯中,加热约2分钟,观察到溶液颜色：浅蓝色 → 棕色 → 砖红色（沉淀）
最好用试管夹夹住试管上部,使试管底部不触及烧杯底部,试管口不朝向实验者.
也可用酒精灯对试管直接加热.
防止试管内的溶液冲出试管,造成烫伤；
缩短实验时间.
（二）脂肪的鉴定
取材、切片、制片：花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片,将薄片放在载玻片的水滴中,用吸水纸吸去装片中的水.
干种子要浸泡3-4小时,新花生的浸泡时间可缩短.
浸泡时间短,不易切片,浸泡时间过长,组织较软,切下的薄片不易成形.切片要尽可能薄些,便于观察.
染色：在子叶薄片上滴2-3滴苏丹Ⅲ（染色3分钟）或苏丹Ⅳ染液（染色1分钟）.
染色时间不宜过长.
漂洗：用吸水纸吸去薄片周围染液,用50%酒精洗去浮色,吸去酒精.
酒精用于洗去浮色,不洗去浮色,会影响对橘黄色脂肪滴的观察.同时,酒精是脂溶性溶剂,可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴.
用吸水纸吸去薄片周围酒精,滴上1-2滴蒸馏水,盖上盖玻片.
滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡.
镜检：先低后高（高倍镜用法：移物换器时针反）,低倍镜下找到花生子叶薄片的最薄处,可看到细胞中有染成橘黄色或红色圆形小颗粒.
装片不宜久放.
时间一长,油滴会溶解在乙醇中.
三、蛋白质的鉴定
制备组织样液.（浸泡、去皮研磨、过滤.）黄豆浸泡1至2天,容易研磨成浆,也可购新鲜豆浆以节约实验时间.加样液约2ml于试管中,加入双缩脲试剂A,摇匀；再加入双缩脲试剂B液3-4滴,摇匀,溶液变紫色.
A液和B液也要分开配制,储存.鉴定时先加A液后加B液.
CuSO4溶液不能多加.
先加NaOH溶液,为Cu2+与蛋白质反应提
供一个碱性的环境.A、B液混装或同时加入,会导致Cu2+变成Cu ( OH ) 2沉淀,而失效.
否则CuSO4蓝色会遮盖反应的真实颜色.可用蛋清代替豆浆.蛋清要先稀释.
如果稀释不够,在实验中蛋清粘在试管壁,与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上,使反应不容易彻底,并且试管也不易洗干净.
附：淀粉的检测和观察用试管取2ml待测组织样液,向试管内滴加2滴碘液,观察颜色变化.碘液不要滴太多，以免影响颜色观察
【实验】生物组织中还原糖，脂肪，蛋白质的鉴定
还原糖的鉴定原理：生物组织中普遍存在的可溶性糖的种类比较多,常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖.前三种糖的分子内都含有游离的、具有还原性的半缩醛羟基,因此叫做还原糖；蔗糖的分子内没有游离的半缩醛羟基,因此叫作非还原糖,不具有还原性.斐林试剂只能鉴定还原糖,在加热的条件,能够与还原糖生成砖红色的沉淀（实际上是Cu2O)而葡萄糖则被氧化成葡萄糖酸.
蛋白质的鉴定与原理：鉴定生物组织中是否含有蛋白质时,常用双缩脲试剂.在碱性溶液（NaOH)中,双缩脲能与铜离子作用,形成紫色或紫红色的络合物,这个反应就叫做双缩脲反应.由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键,因此蛋白质都可以与双缩脲实试剂发生颜色反应,从而鉴定蛋白质的存在.
怎样检测生物组织中的糖类，脂肪和蛋白质
你为什么不看看参考书
还原糖：
1 注意选材，要选糖分较高颜色较浅的果实，如苹果梨
2 婓林试剂要现配现用，要混合加入
3 注意水浴加热50到65摄氏度
脂肪：
1 用显微镜观察，所以制片要认真，选材通常是花生，要切薄
2 用苏丹红染色
3 去浮色
蛋白质：
1 双缩脲试剂要现配现用，而且是用先后顺序，不能混合使用
2 发生反应的是肽键，选材最好是牛奶之类啦，鸡蛋的话要用蛋清，还要防凝固
“生物组织中的还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定”实验，
糖类中还原糖(例葡萄糖、果糖、麦芽糖等)可用斐林试剂检测。先准备组织样液，再准备0·1g/ml的氢氧化钠溶液、0.05g/ml硫酸铜溶液。方法步骤:1.(1)取2ml组织样液加入1支洁净的试管。
(2)再另取2支试管，分别加入2mlNaOH与硫酸铜溶液，再把硫酸铜溶液倒入氢氧化钠溶液的试管，振荡混合均匀，即为斐林试剂。
(3)把新配制的斐林试剂与组织样液,等体积混合，振荡摇匀，然后放入50~60度水浴中保温，观察颜色变化。如出现砖红色沉淀，即说明有还原糖。
非还原糖(淀粉用碘液检测即可)碘遇淀粉变蓝。
脂肪用苏丹三或苏丹四检测，材料可用浸泡过"的花生种子，先制成临时装片，再用显微镜观察。或者把试剂滴加到组织样液中，观察颜色变化。
临时装片制作:用刀片先在花子叶切开，然后做徒手切片，放在清水中，然后用毛笔蘸取最薄的一片放在载玻片中央，滴加苏丹三溶液染色3到5分钟，用吸水纸吸取多余染液，再用体积分数为50%酒精洗去浮色，盖上盖玻片。放在显微镜下观察。脂肪粒被苏丹三染成橘黄色、苏丹四染成红色。(上述徒手切片做不好，可在花生子叶上
刮取少量粉末，直接涂在载玻片上来替代。
蛋白质用双缩脲试剂来检测。双缩脲是由A液(0.1g/ml的氢氧化钠)、B液(O.01g/mL的硫酸铜溶液组成。)
使用时取组织样液(用蛋清稀释液或豆浆)一2mL加入洁净试管，然后先滴加1mLA液，振荡试管摇匀，再滴加3~4滴硫酸铜溶液，摇匀。蛋白质遇双缩脲生成紫色。
甲液和乙液就是分别指NaOH 和CuSO4。一定要注意该试剂的使用方法和顺序。
斐林试剂是德国化学家斐林（Hermann von Fehling，1812年--1885年）在1849年发明的。它是由氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的溶液和硫酸铜的质量分数为0.05 g/mL的溶液，还有酒石酸钾钠配制而成的。它与可溶性的还原性糖(葡萄糖）、果糖和麦芽糖)在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀。因此，斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在与否。
从高中生物的角度来讲，要明确斐林试剂与单糖中的葡萄糖反映生成砖红色沉淀。
配制方法：
将36.4g CuSO4.5H2O溶于200mL水中，用0.5mL浓硫酸酸化，再用水稀释到500mL待用；取173g酒石酸钾钠KNaC4H4O6.4H2O，71g NaOH固体溶于400mL水中，再稀释到500mL．使用时取等体积两溶液混合．
医学上用此试剂检验糖尿病。
使用斐林试剂检测还原糖的步骤：
1：向试管内注入2mL待测组织样液。
2：向试管内注入1mL斐林试剂（甲乙液混合均匀后再注入）。
3：将试管放入盛有50~60摄氏度温水的大烧杯中加热约2min。
4：观察试管中出现的颜色变化。
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