目的 研究骨源性碱性磷酸酶在维生素D缺乏性佝偻病的早期诊断及治疗中的应用价值。 方法 对门诊6月～3岁简易诊断为佝偻病的97例患儿采静脉血，分别检查血清钙、磷、碱性磷酸酶（AKP）及骨源性碱性磷酸酶（NBAP）。分析上述化验值在佝偻病诊断中的灵敏度，应用SPSS10.0统计软件对AKP和NBAP进行相关性分析，NBAP≥200u/L者给予胆维丁乳治疗并观察治疗效果。 结果 AKP和NBAP具有相关性，但在诊断佝偻病时NBAP的灵敏度高，对NBAP≥200u/L者给予胆维丁乳治疗1～3次后，患儿多汗、夜惊等症状在给予治疗后半个月消失，3个月后骨性变化有好转，上述生化指标均恢复正常。 结论 NBAP在小儿佝偻病诊断中灵敏度高、特异性强，是佝偻病早期诊断的可靠指标，并可较好地指导佝偻病治疗。

关键词 佝偻病 骨源性碱性磷酸酶 诊断治疗

小儿佝偻病是儿保防治的四病之一，是儿科常见、多发病，由于日照不足，北方高发，虽经多年防治，其患病率仍高达31.7%。厂商由于缺乏对钙营养问题的科学认识或出于商业目的，在媒体上大肆炒作，致使广大家长盲目给孩子补钙，而对维生素D的作用认识不足，因其过量应用易产生中毒症状，也出现了医生指导维生素D治疗的偏差，为避免中毒而出现用量不足，延误了治疗。是因为以往的检测指标不能及时、准确反映机体钙状态。文献报道 〔1〕 儿童期AKP主要以NBAP为主，约占AKP的51%，但AKP受其他组织器官疾病的影响较大，故认为NBAP更能准确反映骨代谢情况，NBAP作为儿童期骨代谢指标明显优于AKP 〔2〕 。笔者应用骨源性碱性磷酸酶（NBAP）这一反映骨代谢状况的较好生化指标，对我院门诊6个月～3岁儿童进行NBAP检测，同时测定血钙（Ca）、血磷（P）、碱性磷酸酶活性（AKP），对其敏感度、特异度、准确性进行评价，同时指导儿童科学补钙，观察疗效。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择本院儿科门诊就诊的6个月～3岁简易诊断为佝偻病的97例患儿，其中男56例，女41例。

1.2 方法

1.2.1 诊断 简易诊断:按1986年卫生部颁发的佝偻病简易诊断标准进行筛查，简易诊断依据病史、症状、体征为指标，其中体征为主要条件。诊断时结合年龄、季节、喂养、维生素D缺乏史及其他病史等进行综合分析决定。NBAP诊断标准 〔2〕 :0～7岁小儿NBAP≤200u/L为正常201～250u/L为亚临床状态 〔3〕 >250u/L为诊断界限。

1.2.2 生化检查 采静脉血进行血钙（Ca）、血磷（P）、碱性磷酸酶活性（AKP），NBAP检测。血清钙、磷、AKP在7170A全自动生化分析仪上测定，各参数均按仪器进行设置NBAP采用北京中生生物工程高科技公司提供的NBAP试剂盒干化学免疫法，按北京中生协和医学科学技术开发公司研制的试剂盒说明书操作。

1.2.3 统计学方法 χ 2 检验，采用SPSS10.0统计软件，并进行相关性分析，检验各生化指标的灵敏度。

1.2.4 治疗 对于NBAP检测>200u/L者给予胆维丁乳15mg治疗，1个月、2个月及3个月后复查血钙（Ca）、血磷（P）、AKP及NBAP，NBAP仍高于200u/L者再给予胆维丁乳15mg治疗，评价疗效。

生化携带污染标准

IgE是确诊过敏的唯一临床指标，人体的免疫细胞目前区分为三类，分别是TH1、TH2和Treg。在健康状态下，TH1和TH2会互相平衡，且共同受到Treg调控。当Treg调控能力不足时或接触到某些蛋白质或细小分子（尘螨花粉或海鲜等食物后，使TH2过度活化，导致 TH2细胞激素分泌量过高，就会帮助B细胞制造较多的过敏抗体IGE，因而出现过敏症状，康敏元抗过敏益生菌主要可调控因过敏而反应过高的TH2型细胞激素分泌量，进而调节免疫细胞活性平衡，可通过增进TH1型免疫反应来调控因过敏而反应过度的TH2型免疫反应的方法。

【过敏性咳嗽血清学IGE检查】

以过敏患者血清作为实验材料的本外试验方法称为血清学试验。其它体液如炎症部位分泌物、渗出物、灌洗液也可采用相同的实验方法进行检测。主要检测项目有总IgE和特异性IgE，即过敏原特异性IgE。

【什么是总IgE？】

IgE即免疫球蛋白E，是I型变态反应病如过敏性鼻炎、过敏性哮喘、异位性皮炎、湿疹、急慢性荨麻疹发病机制中起主要作用的免疫分子，因而在过敏反应的免疫学实验诊断中是首选的检测项目。总IgE是过敏性疾病的特异性检查项目，IgE水平增高提示I型变态反应病的可能性大，但不能用于判断过敏原。

【IgE的特点】

IgE是血清浓度最低的免疫球蛋白 ，只有血清中IgG浓度的万分之一。IgE对热不稳定，是半衰期最短一的免疫球蛋白 ，只有2.8天，与细胞表面结合的IgE半衰期稍长，8~14天，IgE由变应原入侵部位（鼻咽、支气管、胃肠道）的黏膜固有层中的浆细胞合成。在各类免疫球蛋白中，IgE是合成率最低、分解率最高的。属于亲细胞抗体，过敏体质者的胎儿脐带血中IgE浓度可能升高，检测脐血中IgE浓度可用于评估胎儿过敏体质的可能性。

【IgE检测方法】

通常用ELISA方法检测总IgE。由于血清IgE浓度很低，一般酶免疫试验方法的敏感性不足以检出血清IgE，现在常规实验室检测血清IgE的试剂盒采用生物素——抗生物素蛋白 放大的ELISA。试剂盒中所含用于制定标准曲线的IgE标准品和检测结果的IgE浓度单位与其它免疫球蛋白 不同，不是用mg/L表示，而是用u/ml或ku/l表示。

【IgE的正常值（参考范围）】：

血清IgE水平在正常人群中呈偏态分布，即多数人为0或接近于0，IgE水平越高的人数越少。因此计算平均值时应计算几何平均值才能反映其真实情况，即用对数转换后其分布才能近似正态分布。

健康人群血清IgE水平与年龄关系较大，小儿和老年人的IgE水平低于成年人。新生儿血清中IgE水平很低，接近于零。随年龄增长，IgE水平也不断升高，5~7岁后接近正常人水平。按Pharmacia公司提供的参考范围，1个月以内<12KU/L,1岁<11KU/L,2~4岁<33KU/L,5岁以上至成人<85KU/L.

过敏性疾病患者的血清IgE水平可达2000~8000KU/L,当IgE水平高于2000KU/L时应考虑寄生虫感染.

有时血清总IgE水平检测结果为0或参考范围内低值,并不能排除过敏性疾病的可能,须结合临床表现和血清特异性IgE检测结果进行判断.

【什么是特异性IgE检测(sIgE）？】

通常所称的过敏原检测，并非真正检测血液样本中的过敏原分子，而是间接地检测其中针对某种过敏原的特异性IgE分子，特异性IgE检测实际上是检测过敏原特异性IgE，即检测样本中针对某种变应原的特异性IgE，从而间接地判断患者是否对某种过敏原过敏。

环境中常见的过敏原包括以下类别：

寄生虫和微生物：各种螨类（屋尘螨和粉尘螨等）、各种真菌（点青霉、烟曲霉、分枝孢霉、交连孢霉等）、蟑螂。

植物花粉：各种草花粉（豚草、葎草、蒿草）、各种树花粉（桑树、柏树、悬铃木、桦树、榆树、柳树、杨树等）。

动物皮毛：猫、狗、马、鸽子等动物的毛和皮屑。

呼吸道过敏症不完全是由过敏原引起的，真正的罪魁祸首是免疫系统本身。过敏体质患者的免疫系统不能正确识别花粉或真菌，它把这些无害物质识别成有害的微生物，进而发生了不应有的免疫应答：与哮喘发作一样，这些症状严重时可能会引发致命的后果。抗过敏益生菌和过敏免疫系统的相关性研究

近年来，抗过敏益生菌调节免疫功能，平衡因TH2过度反应而引起的过敏反应这一机理在过敏性疾病免疫学领域产生了一个新理论，为这场关于抗过敏益生菌的革命铺平了道路。

康敏元抗过敏益生菌可降低过敏原特异性IgE抗体

康敏元抗过敏益生菌降IgE人体临床实验功效证实：

1.有助于减少血清中特异性IgE抗体之生成，迅速缓解过敏反应；

2.有助于促进脾脏细胞IFN-γ的分泌量，诱导正确的免疫应答；

3.有助于减少过敏反应相关细胞激素IL-5的分泌量减少过敏复发；

4.有助于提升脾脏细胞增生能力，诱导TH1型免疫，调整过敏体质。

IgE变化量 补充康敏元加强型抗敏益生菌使过敏患者血清中的IgE浓度显著下降，且刺激免疫细胞IFN-γ分泌量上升，减少人体受过敏原的刺激，证实能够调整过敏反应免疫系统的作用。

降低发炎介质 趋化激素也叫免疫细胞激素分泌，这一发炎介质在人体发炎后或过敏发生后会大量分泌，因此也被视为重要的发炎与过敏反应指标，补充康敏元加强型抗敏益生菌其血液中的发炎介质分泌显著降低，最大程度的反应在呼吸道可缓解气喘及皮肤黏膜过敏反应，具有调整过敏体质的能力。

降低肺呼吸阻力 康敏元加强型益生菌对于哮喘合并过敏性鼻炎确实有改善效果，尤其在夜间更能增加呼吸道畅通，且随着服用时间增加而效果更好，大大提升过敏患者的生活质量不再影响到隔日的工作与学习。

改善TH1与TH2细胞比值 补充康敏元加强型抗敏益生菌后有助于减少过敏反应相关细胞激素IL- 4、IL-5以及减少IFN-α与IL-13的分泌量，可直接降低Th2细胞的活性；其次，可刺激脾脏细胞增加细胞激素IL-10、IL-12与IFN-γ干扰素的分泌，使T细胞免疫反应趋向Th1路径，发挥着免疫调节，调整过敏体质，改善过敏症状的重要作用。

保健食品标识规定

相关文件或文献对携带污染的定义或内涵不尽相同，在中华人民共和国医药行业标准《全自动生化分析仪》（YY/T0654-2017）[8]中被定义为"由测量系统将一个检测样本反应携带到另一个检测样品反应的分析物不连续量，由此错误地影响了另一个检测样品的表现量"，其内涵与美国病理家协会（CAP）认可核查清单、美国临床及实验室标准化委员会（CLSI）EP07A3[9]，EP10A3[10]等文件中对携带污染的描述或定义基本一致，均特指样品的携带。近些年的文献和制造商说明中[6，11]对于携带污染这一名词的使用扩展到了试剂的携带污染。当这样的携带污染发生在两个特定的检测项目（试剂）之间时，也被称交叉污染。

法律依据：

《中华人民共和国标准化法》第二条本法所称标准（含标准样品），是指农业、工业、服务业以及社会事业等领域需要统一的技术要求。

标准包括国家标准、行业标准、地方标准和团体标准、企业标准。国家标准分为强制性标准、推荐性标准，行业标准、地方标准是推荐性标准。

强制性标准必须执行。国家鼓励采用推荐性标准。

生化需氧量200261浓度范围

随着社会经济的发展,生活水平的提高,人们的消费观念、健康观念发生了较大变化。消费者的自我保健意识日益增强,对保健食品的需求越来越高,这为保健食品产业的发展提供了一个重要的契机。我国的保健食品市场是一个存在巨大发展潜力的市场。但是保健食品行业存在着低水平竞争,重公告轻研发,行业信誉差等严重的问题。为了保证食品的安全，下面是我为大家整理的关于：保健食品标识规定。欢迎阅读!

保健食品标识规定

第一条　为了加强对保健食品标识和产品 说明书 的监督管理，根据《中华人民共和国食品卫生法》(以下简称《食品卫生法》和《保健食品管理办法》的有关要求，特制定本规定。

第二条　本规定适用于在国内销售的一切国产和进口保健食品。

第三条　本规定所用定义如下：

保健食品：系指表明具有特定保健功能的食品。即适宜于特定人群食用，具有调节机体功能，不以治疗疾病为目的食品。

功效成分：指保健食品中产生保健作用的组分。

食品标识：即通常所说的食品标签，包括食品包装上的文字、图形、符号以及说明物。借以显示或说明食品的特征、作用、保存条件与期限、食用人群与食用 方法 ，以及其他有关信息。

最小销售包装：指销售过程中，以最小交货单元交付给消费者的食品包装。

主要展示版面：指消费者选购商品时，在包装标签上最容易看到或展示面积最大的表面，一般的食品销售包装至少有一个表面可用作主要展示版面。

信息版面：是紧接“主要展示版面”右侧的包装表面。如果因包装设计原因，紧接“主要展示版面”右侧的“信息版面”不能满足标签标示的要求(如折叠的包装袋)时，则“信息版面”可选择右侧版面右侧的下一个版面。

保健食品专用名称：表明保健食品的主要原料、产品物理形态、主要加工工艺等食品属性的名称。

保健食品作用名称：在保健食品名称中，用于表明保健食品主要作用的名称部分。

保健作用声明 短语 ：以短语形式，对保健作用的简单介绍或描述。

第四条　保健食品标识与产品说明书的所有标识内容必须符合下列基本原则：

保健食品名称、保健作用、功效成分、适宜人群和保健食品批准文号必须与卫生部颁发的《保健食品批准证书》所载明的内容相一致。

应科学、通俗易懂，不得利用封建迷信进行保健食品宣传。

应与产品的质量要求相符，不得以误导性的文字、图形、符号描述或暗示某一保健食品或保健食品的某一性质与另一产品的相似或相同。

不得以虚假、夸张或欺骗性的文字、图形、符号描述或暗示保健食品的保健作用，也不得描述或暗示保健食品具有治疗疾病的功用。

第五条　保健食品标识与产品说明书的标示方式必须符合以下基本原则：

保健食品标识不得与包装容器分开、所附的产品说明书应置于产品外包装内。

各项标识内容应按本办法的规定标示于相应的版面内，当有一个“信息版面”不够时，可标于第二个“信息版面”。

保健食品标识和产品说明书的文字、图形、符号必须清晰、醒目、直观、易于辨认和识读。背景和底色应采用对比色。

保健食品标识和产品说明书的文字、图形、符号必须牢固、持久，不得在流通和食品过程中变得模糊甚至脱落。

必须以规范的汉字为主要文字，可以同时使用汉语拼音、少数民族文字或外文，但必须与汉字内容有直接的对应关系，并书写正确。所使用的汉语拼音或外国文字不得大于相应的汉字。

计量单位必须采用国家法定的计量单位。

第六条　保健食品标识与产品说明书必须标示本《办法》附件1所规定的各项内容，其标示方式必须符合本《办法》附件1所规定的相应要求。

第七条　凡保健食品标识和产品说明书的标示内容或标示方式不符合本《办法》者，依照《食品卫生法》第四十五、四十六条处罚。

第八条　本规定由卫生部负责解释。

第九条　本规定自颁布之日起实施。

保健食品功能学评价程序和检验方法

1.主题内容和适用范围

本程序和检验方法规定了评价食品保健作用的统一程序和检验方法。

本程序和检验方法适用于评价食品的免疫调节、延缓衰老、改善记忆、促进生长发育、抗疲劳、减肥、耐缺氧、抗辐射、抗突变、抑制肿瘤、调节血脂、改善性功能等作用。

本程序和检验方法规定了评价食品保健作用的人体试食试验规程。

2.进行食品保健作用评价的基本要求

2.1对受试物的要求

2.1.1提供受试物的物理、化学性质(包括化学结构、纯度、稳定性等)等有关资料。

2.1.2受试物必须是规格化的产品，即符合既定的生产工艺、配方及质量标准。

2.1.3提供受试物安全性毒理学评价的资料，受试物必须是已经过食品安全性毒理学评价确认为安全的物质。

2.2对实验动物的要求

2.2.1根据各种试验的具体要求，合理选择实验动物。常用大鼠和小鼠，品系不限，推荐使用近交系动物。

2.2.2 动物的性别不限，可根据试验需要进行选择。动物的数量的要求为小鼠每组至少10只(单一性别)，大鼠每组至少8只(单一性别)。动物的年龄可根据具体试验需要而定。

2.2.3 动物应达到二级实验动物的要求。

2.3 给受试物的剂量及时间

2.3.1 各种试验至少应设3个剂量组，1个对照组，必要时可设阳性对照组。剂量选择应合理，尽可能找出最低有效剂量。在3个剂量组中，其中一个剂量应相当于人推荐摄入量的5-10倍左右。

2.3.2 给受试物的时间应根据具体试验而定，原则上至少1个月。

3.试验项目、试验原则及结果判定

3.1 免疫调节作用

3.1.1 试验项目

3.1.1.1.1 脏器/体重比值

胸腺/体重比值

脾脏/体重比值

3.1.1.1.2 细胞免疫功能测定

小鼠脾淋巴细胞转化实验

迟发型变态反应

3.1.1.1.3 体液免疫功能测定

抗体生成细胞检测

血清溶血素测定

3.1.1.1.4 单核-巨噬细胞功能测定

小鼠碳廓清试验

小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验

3.1.1.1.5 N细胞活性测定

3.1.1.2 人体试食试验

3.1.1.2.1 细胞免疫功能测定

外周血淋巴细胞转化试验

3.1.1.2.2 体液免疫功能试验

单向免疫扩散法测定IgG、IgA、IgM

3.1.1.2.3 非特异性免疫功能测定

吞噬与杀菌试验

3.1.1.2.4 N细胞活性测定

3.1.2 试验原则

要求选择一组能够全面反映免疫系统各方面功能的试验，其中细胞免疫、体液免疫、单核-巨噬细胞功能三个方面至少各选择1种试验，在确保安全的前提下尽可能进行人体试食试验。

3.1.3 结果判定

在一组试验中，受试物对免疫系统某方面的试验具有增强作用而对其他试验无抑制作用，可以判定该受试物具有该方面的免疫调节效应对任何一项免疫试验具有抑制作用可判定该受试物具有免疫抑制效应。

在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能及N细胞功能检测中，如有两个以上(含两个)功能检测结果阳性，即可判定该受试物具有免疫调节作用。

3.2 延缓衰老作用

3.2.1 试验项目

3.2.1.1 动物试验

3.2.1.1.1 生存试验

小鼠生存试验

大鼠生存试验

果蝇生存试验

3.2.1.1.2 过氧化脂质含量测定

血(或组织)中过氧化脂质降解产物丙二醛(MDA)含量测定

组织中脂褐质含量测定

3.2.1.1.3 抗氧化酶活力测定

血(或组织)中超氧化物歧化酶(SOD)活力测定

血(或组织)中谷胱甘肽过氧化物酶(GS-PX)活力测定

3.2.1.2 人体试食试验

血中过氧化脂质降解产物丙二醛(MDA)含量测定

血中超氧化物歧化酶(SOD)活力测定

血中谷胱甘肽过氧化物酶(GS-PX)活力测定

3.2.2 试验原则

衰老机制比较复杂，迄今尚无一种公认的衰老机制学说，因而无单一、简便、实用的衰老指标可供应用，应采用尽可能多的试验方法，以保证试验结果的可信性。动物试验，除上述生存试验，过氧化脂质含量测定、抗氧化酶活力测定3个方面各选一项必做外，可能时应多选择一些指标(如脑、肝组织中单胺氧化酶(MAO-B)活力测定等)加以辅助。生存试验是最直观、最可靠的实验方法，果蝇具有生长周期短、繁殖快、 饲养 简便等优点，通常多选果蝇作生存试验，但果蝇种系分类地位与人较远，故必须辅助过氧化脂质含量测定及抗氧化酶活力测定才能判断是否具有延缓衰老作用。生化指标测定应选用老龄鼠，除设老龄对照外，最好同时增设少龄对照，以比较受试物抗氧化的程度，必要时可将动物试验与人体试食试验相结合综合评价。

3.2.3 结果判定

若大鼠或小鼠生存试验为阳性，即可判定该受试物具有延缓衰老的作用。

若果蝇生存试验，过氧化脂质和抗氧化酶三项指标均为阳性，即可判定该受试物具有延缓衰老的作用。

若过氧化脂质和抗氧化酶两项为阳性，可判定该受试物具有抗氧化作用，并提示可能具有延缓衰老作用。

3.3 改善记忆作用

3.3.1 动物试验

跳台试验

避暗试验

穿梭箱试验

水迷宫试验

3.3.1.2 人体试食试验

韦氏记忆量表

临订记忆量表

3.3.2 试验原则

3.3.2.1 试验应通过训练前、训练后及重测验前3种不同的给予受试物方法观察其对记忆全过程(记忆的获得、记忆巩固、记忆再现)的影响。

3.3.2.2 应采用一组(2个以上)行为学试验方法，以保证实验结果的可靠性。

3.3.2.3 人体试食试验为必做项目，并应在动物试验有效的前提下进行。

3.3.2.4 除上述试验项目外，还可以选用嗅觉厌恶试验、味觉厌恶试验、操作式条件反射试验，连续强化程序试验、比率程序试验、间隔程序试验。

3.3.3 结果判定

动物试验2项或2项以上的指标为阳性，且2次或2次以上的重复测试结果一致，可以认为该受试物具有改善该类动物记忆作用

若人体试食试验结果阳性，则可认为该受试物具有改善人体记忆作用。

3.4 促进生长发育作用

3.4.1 试验项目

3.4.1.1 胎仔情况 活胎数、?雄比例、死胎数、分娩胎仔总数。

3.4.1.2 体重及食物利用率 记录出生时及生后4、7、14、21、30、60d幼鼠的体重，计算断乳后幼鼠的食物利用率。

3.4.1.3 生理发育指标 记录耳廓分离、门齿萌出、开眼、长毛时间、阴道开放、睾丸下降时间。

3.4.1.4 神经反射指标 平面翻正、前肢抓力、悬崖回避、嗅觉定位、听觉警戒、负趋地性、回旋运动、视觉发育、空中翻正、 游泳 发育。

3.4.2 试验原则

3.4.2.1 给受试物的时间可根据具体情况选择在母鼠孕期或哺乳期至成年期。

3.4.2.2 在神经反射指标中应选择一组(5个以上)的行为学试验方法，以保证结果的可靠性。

3.4.3 结果判定

在胎仔情况、体重及食物利用率、生理发育、神经反射4类指标中有3类以上(含3类)指标为阳性，可认为受试物有促进生长发育的作用。

3.5 抗疲劳作用

3.5.1 试验项目

负重游泳试验

爬杆试验

血乳

血清尿素氮

肝/肌糖原测定

3.5.2 试验原则

运动试验与生化指标检测相结合。在进行游泳或爬杆试验前，动物应进行初筛。除以上生化指标外，还可检测血糖、乳酸胶氢、血红蛋白以及磷肌酸等指标。

3.5.3 结果判定

若1项以上(含1项)运动试验和2项以上(含2项)生化指标为阳性，即可以判断该受试物具有抗疲劳作用。

3.6 减肥作用

3.6.1 减肥原则

3.6.1.1 减除体现人多余的脂肪，不单纯以减轻体重为标准。

3.6.1.2 每日营养素的摄入量应基本保证机体正常生命活动的要求。

3.6.1.3 对机体健康无明显损害。

3.6.2 试验项目

3.6.2.1 动物试验

体重

体内脂肪重量(睾丸及肾周围脂肪垫)

3.6.2.2 人体试食试验

体重，体重指数，腰围，腹围，臀围

体内脂肪含量

3.6.3 试验原则

在进行减肥试验时，除以上指标必测外，还应进行机体营养状况检测，运动耐力测试以及与健康有关的 其它 指标的观察。人体试食试验为必做项目，动物试验与人体试食试验相结合，综合进行评价。

3.6.4 结果判定

在动物试验中，体重及体内脂肪垫2个指标均阳性，并且对机体健康无明显损害，即可初步判定该受试物具有减肥作用。

在人体试食试验中，体内脂肪量显著减少，且对机体健康无明显损害，可判定该受试物具有减肥作用。

3.7 耐缺氧作用

3.7.1 试验项目

小鼠常压耐缺氧实验

3.7.2 结果判定

耐缺氧实验阳性，说明该受试物具有耐缺氧作用。

3.8 抗辐射作用

3.8.1 试验项目

3.8.1.1 亚急性试验

30天存活率或平均存活时间

白细胞总数

3.8.1.2 亚慢性或慢性试验

小鼠睾丸染色体畸变试验

小鼠骨髓细胞微核试验

3.8.2 试验原则

较高剂量一次辐射，选择亚急性试验小剂量多次辐射，选择亚慢性或慢性试验。

3.8.3 结果判定

亚急性试验项目中2项结果为阳性，则可判定该受试物对较高剂量一次辐射有拮抗作用。

亚慢性或慢性试验中2项结果为阳性，则可判定该受试物对小剂量多次辐射有拮抗作用。

3.9 抗突变作用

3.9.1 试验项目

Ames试验或V79细胞基因突变试验

小鼠骨髓细胞微核试验

小鼠睾丸染色体畸变试验

3.9.2 试验原则

Ames试验与V79细胞基因突变试验任选一项，采用体内与体外试验相结合的原则。

3.9.3 结果判定

抗突变三项试验中有两项为阳性时，则可判定该受试物具有抗突变作用。

3.10 抑制肿瘤作用

3.10.1 试验项目

动物诱发性肿瘤试验

动物移植性肿瘤试验

免疫功能试验

N细胞活性测定

单核-巨噬细胞功能测定

3.10.2 试验原则

动物诱发性肿瘤试验及动物移植性肿瘤试验两项中任选一项，同时必做2项免疫功能试验

3.10.3 结果判定

动物诱发性肿瘤试验及动物移植性肿瘤试验两项试验中有一项为阳性，并且对免疫功能无抑作用，则可判定该受试物具有抑制肿瘤的作用。

3.11 调节血脂作用

3.11.1 试验项目

大鼠脂代谢紊乱模型法

人体试食试验

3.11.2 试验原则

尽可能动物试验和人体试食试验相结合，综合进行评价。

3.11.3 结果判定

大鼠脂代谢紊乱模型法：结果为阳性时，可初步判定该受试物具有调节血脂作用。

人体试食试验阳性，可判定该受试物对人体具有调节血脂作用。

3.12 改善性功能作用

3.12.1 试验项目

3.12.1.1 交配试验

大鼠交配试验

小鼠交配试验

3.12.1.2 勃起试验

3.12.2 试验原则

评价改善性功能作用，应主要观察是否增强性交功能及阴茎勃起功能。考虑到影响性功能的因素很多，而睾酮对性功能的维持具有重要意义，必要时可对血清睾酮水平进行测定。

3.12.3 结果判定

交配试验(大、小鼠交配试验任选一项)或勃起试验中有一项试验结果为阳性，即可判定该受试物具有改善性功能的作用。

3.13 人体试食试验规程

4.评价食品保健作用时要考虑的因素

4.1 人的可能摄入量除一般人群的摄入量外，还应考虑特殊的和敏感的人群(如 儿童 、孕妇及高摄入量人群)。

4.2 人体资料由于存在著动物与人之间的种属差异、在将动物试验结果外推到人时，应尽可能收集人群服用受试物的效应资料，若体外或体内动物试验未观察到或不易观察到食品的保健效应或观察到不同效应，而有关资料提示对人有保健作用时，在保证安全的前提下，应进行必要的人体试食试验。

4.3 在将本程序所列试验的阳性结果用于评价食品的保健作用时，应考虑结果的重复性和剂量反应关系，并由此找出其最小有作用剂量。

4.4 食品保健作用的检测及评价应由卫生部认定的保健食品功能学检验机构承担。

附加说明

本程序和检验方法由卫生部卫生监督司提出。

本程序和检验方法由卫生部食品卫生监督检验所《保健食品功能学评价程序和检验方法》起草小组负责起草。

本程序和检验方法由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。

进行未列入程序范围的保健食品功能学评价时，应由保健食品的研制生产者提出检验及评价方法，经保健食品功能学检验机构验证及卫生部食品卫生监督检验所组织专家评审，报卫生部批准后方可列入本程序。

本程序中无明确判定方法的人体试食试验结果，可由负责试验单位组织专家组(至少五人)，按本程序提出的原则要求共同予以评价，并提出判定结果。

免疫调节作用检验方法

动物试验

1.实验动物

选用小鼠。推荐使用近交系小鼠，如C57BL/6J、BALB/C等，6-8周龄，18-22g，雌雄均可，数量为单一性别每组至少10只。

2.给受试物的时间、剂量分组

经口给予受试物15-30d，设3个剂量组和1个对照组。3个剂量组中，其中1个剂量应相当于人推荐摄入量的10倍左右。

3.实验方法

3.1 ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验

可任选下列方法之一

3.1.1 M法

3.1.1.1 原理

当淋巴细胞受ConA、PA等致分裂原或特异性抗原刺激后发生母细胞转化，活细胞特别是增殖细胞通过线粒体水解　将M(一种淡黄色的唑氮盐)分解为兰紫色的甲月替(formazan)结晶而显色，其光密度值能够反映细胞的增殖情况。

3.1.1.2 仪器和材料

RPMI1640细胞培养液、小牛血清、2-巯基乙醇(2-ME)、青霉素、链霉素、刀豆蛋白A(ConA)、盐酸、异丙醇、M、Hanks液、PBS缓冲液(p7.2-7.4)

200目筛网、24孔培养板，96孔培养板(平底)，手术器械、二氧化碳培养箱、酶联免疫检测仪、超净工作台

3.1.1.3 实验步骤

完全培养液 RPMI1640 培养液过滤除菌，用前加入10%小牛血清，1%谷氨酰胺(200mmol/L)，青霉素(100U/ml)，链霉素(100ug/L)及5×10-5mol/L的2-巯基乙醇，用无菌的1mol/L的Cl或1mol/L的NaO调p至7.0-7.2，即完全培养液。

ConA液 用双蒸水配制成100ug/ml的溶液，过滤除菌，在低温冰箱(-20℃)保存。

无菌Hanks液 用前以3.5%的无菌NaCO3调p7.2-7.4。

M液 将5mgM溶于1ml p7.2的PBS中，现配现用。

酸性异丙醇溶液 96ml 异丙醇中加入4ml 1mo1/L的C1，临用前配制。

3.1.1.3.2 脾细胞悬液制备

无菌取脾，置于盛有适量无菌Hanks液的小平皿中，用镊子轻轻将脾撕碎，制成单个细胞悬液。经200目筛网过滤，用Hanks液洗3次，每次离心10min (1000r/min)。然后将细胞悬浮于2ml的完全培养液中，用台酚兰染色计数活细胞数(应在95%以上)，调整细胞浓度为2×106个/ml。

3.1.1.3.3淋巴细胞增殖反应

将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1ml，一孔加50ul ConA液(相当5ug/ml)，另一孔作为对照，置5%CO2，37℃培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7ml不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入M(5mg/ml)50u1/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1ml酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解。然后分装到96孔培养板中，每个孔分装6孔作为平行样，用酶联免疫检测仪，以570nm波长测定光密度值。也可将溶解液直接移入1ml比色杯中，在721分光光度计上比色测定，波长570nm。

3.1.1.4 数据处理及结果判定

一般采用方差分析进行数据统计。用加ConA孔的光密度值减去不加ConA孔的光密度值代表淋巴细胞的增殖能力，受试物组的光密度值显著高于对照组的光密度值，即可判定该项试验结果阳性。

3.1.2 同位素掺入法

3.1.2.1 原理

淋巴细胞在有丝分裂原PA、ConA等的刺激下，产生增殖反应，DNA和RNA合成明显增加，如在培养液中加入3-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)，则可被转化中的细胞摄入。测定标记淋巴细胞和放射强度可反映淋巴细胞增殖的程度。

3.1.2.2 仪器和材料

RPMI-1640细胞培养液、小牛血清、2-巯基乙醇(2-ME)、青霉素、链霉素、刀豆蛋白A (ConA)、Hanks液 、PBS缓冲液(p7.2-7.4)、3H-TdR、闪烁液[2.5-二苯基恶唑(PPO) 0.5g、1，4-双-(5-苯基恶唑基)-苯(POPOP)0.25g、二甲苯500ml混匀]

200目筛网，96孔培养板(平底)，手术器械、二氧化碳培养箱、超净工作台、液体闪烁仪、多头细胞取集器、49型玻璃纤维滤纸。

3.1.2.3 实验步骤

3.1.2.3.1 脾细胞悬液制备

无菌取脾，置于盛有适量无菌Hanks液的小平皿中，用镊子轻轻将脾撕碎，制成单细胞悬液。经200目筛网过滤，用Hanks液洗3次，每次离心10min(1000r/min)。然后将细胞悬浮于2ml的完全培养液中，用台酚兰染色计数活细胞数(应在95%以上)，最后RPMI1640完全培养液将细胞数调成5×105个/ml。

3.1.2.3.2 淋巴细胞增殖反应：

将脾细胞悬液加入到96孔培养板中，200ul/孔，每一份脾细胞悬液分装6个孔，3孔加ConA(5ug/ml)，另3个孔不加ConA作为对照。置5% CO2，37℃培养72h，培养结束前6h，每孔加入3H-TdR 20u1，使其终浓度为(3.7-18.5)×104Bq/ml。用多头细胞取集器将细胞取集于玻璃纤维滤纸上。滤纸片充分干燥后置测量瓶中，加入7ml闪烁液，用液闪仪测定每分钟脉冲数(cpm)。

3.1.2.4 数据处理及结果判定

一般采用方差分析进行数据统计。以每分钟脉冲数(cpm)表示增殖程度，用刺激指数(SI)来表示试验孔cpm 。

bod小于1mg/L，表示干净的水，超过3-4mg/L表明有机物质污染。

微生物分解存在于水中的可生化降解有机物所进行的生物化学反应过程中所消耗的溶解氧的数量。以毫克/升或百分率、ppm表示。它是反映水中有机污染物含量的一个综合指标。如果进行生物氧化的时间为五天就称为五日生化需氧量（BOD5），相应地还有BOD10、BOD20 。

生化需氧量测量标准：

虽然生化需氧量并非一项精确定量的检测，但是由于其间接反映了水中有机物质的相对含量，故而BOD长期以来作为一项环境监测指标被广泛使用；在水环境模拟中，由于对水中每种化合物分别考虑也并不现实，同样使用BOD来模拟水中有机物的变化。

生化需氧量和化学需氧量(COD)的比值能说明水中的难以生化分解的有机物占比，微生物难以分解的有机污染物对环境造成的危害更大。通常认为废水中这一比值大于0.3时适合使用生化处理。

在BOD的测量中，通常规定使用20℃、5天的测试条件，并将结果以氧的mg/L表示，记为五日生化需氧量，符号，这一指标系由英国皇家污水处理委员会确定。

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