要看您是做的什么产品，国家有关规定工业产品生产许可证目录内的必须做生产许可证：

工业产品生产许可证目录

序号产品名称申证单元

1人造板（1) 胶合板；（2） 刨花板；（3） 定向刨花板；（4） 中密度纤维板；（5) 装饰单板贴面人造板；（6）浸渍胶膜纸饰面人造板；(7）细木工板；（8）实木复合地板；（9） 浸渍纸层压木质地板；（10）竹地板；（11）实木地板

2钢筋混凝土用变形钢筋（一）钢筋混凝土用热轧带肋钢筋(1)钢筋混凝土用热轧带肋钢筋（钢坯）；（2）钢筋混凝土用热轧带肋钢筋（含钢坯)；（3）钢筋混凝土用热轧带肋钢筋（不含钢坯）；（4）钢筋混凝土用余热处理钢筋；（5）钢筋混凝土用热轧光圆钢筋

（二）冷轧带肋钢筋（1）冷轧带肋钢筋

3预应力混凝土用钢丝钢绞线（1）预应力混凝土用钢丝；（2）中强度预应力混凝土用钢丝；（3）预应力混凝土用钢棒；（4）预应力混凝土用钢绞线

4冶炼用耐火材料（1）硅 砖；（2）粘土砖；（3）高铝砖；（4）（铝）镁碳砖；（5）特种耐火制品

5圆股钢丝绳（1）通用钢丝绳；（2）专用钢丝绳

6轴承钢材（1）轴承钢型钢；（2）轴承钢钢管；（3）轴承钢钢丝；（4）渗碳轴承钢

7泵（1）小型潜水电泵；（2）潜水螺杆电泵；（3）污水污物潜水电泵；（4）井用潜水电泵；（5）微型电泵；（6）化工离心泵；（7）塑料离心泵；（8）磁力离心泵；（9）屏蔽离心泵；（10）石油化工离心泵；（11）热水离心泵；（12）多级离心泵

8空气压缩机（1）；往复活塞空气压缩机；（2）隔膜压缩机；（3）螺杆空气压缩机*；（4）滑片空气压缩机；（5）压缩空气干燥器

9蓄电池(1)起动用铅酸蓄电池；(2)牵引用铅酸蓄电池；（3）内燃机车用铅酸蓄电池；（4）铁路客车用铅酸蓄电池；（5）固定型铅酸蓄电池；（6）小型阀控密封式铅酸蓄电池；（7）摩托车用铅酸蓄电池；（8）煤矿防爆特殊型电源装置用铅酸蓄电池；（9）储能用铅酸蓄电池；（10）电动助力车用密封铅酸蓄电池；（11）铅酸蓄电池用极板

10机动脱粒机(1)全喂入机动脱粒机；（2）半喂入机动脱粒机

11防爆电气（1）防爆电机：中心高≤160mm或额定功率≤15kW；（2）防爆电机：160mm＜中心高≤280mm或15kW＜额定功率≤100kW；（3）防爆电机：280mm＜中心高≤500mm或100kW＜额定功率≤500kW；（4）防爆电机:中心高＞500mm 或额定功率＞500kW；（5）防爆电泵类；（6）防爆配电装置类；（7）防爆开关、控制及保护产品；（8）防爆起动器类；（9）防爆变压器类；（10）防爆电动执行机构、电磁阀类；（11）防爆插接装置；（12）防爆监控产品或系统；（13）防爆通讯、信号装置；（14）防爆制冷、通风设备；（15）防爆电加热产品；（16）防爆附件、Ex元件；（17））防爆仪器仪表；（18）安全栅类；（19）防爆仪表箱类）

12砂轮（1）陶瓷结合剂单元；（2）树脂结合剂单元；（3）橡胶结合剂单元

13内燃机（1）单缸柴油机≤441.20kW(600马力)；（2）多缸柴油机功率；（3）多缸柴油机功率＞58.82～132.60kW；（4）多缸柴油机功率＞132.60～441.20kW；（5）汽油机≤22.10kW(30马力)

14电线电缆(1)架空绞线；（2）漆包圆绕组线；（3）塑料绝缘控制电缆；（4）额定电压1kV和3kV挤包绝缘电力电缆；（5）额定电压6kV到35kV挤包绝缘电力电缆；（6）架空绝缘电缆

15电焊条（1）酸性碳钢焊条；（2）碱性碳钢焊条；（3）低合金钢焊条；（4）不锈钢焊条；（5）堆焊焊条；（6）铸铁焊条；（7）铝及铝合金焊条；（8）铜及铜合金焊条；（9）镍及镍合金焊条

16电子整流器（1）普通整流管；（2）普通晶闸管；（3）快速晶闸管

17 轻小型起重运输设备：（一） 轻小型起重运输设备（1）千斤顶；（2）手动葫芦；（3）带式输送机；（4）起重滑车

（二）调度绞车调度绞车

18卫星电视广播地面接收设备（1）卫星电视接收天线；（2）室外单元（含一体化）；（3）卫星模拟电视接收机；（4）卫星数字电视接收机注1；（5）卫星数字电视接收调制器；（6）卫星模拟电视接收调制器；（7）内藏式卫星电视接收机

19集成电路（IC卡）及读写机（1）IC卡(带触点)；（2）IC卡(无触点)；（3）IC卡读写机

20化肥：（一）复混肥料（1）复混肥料（复合肥料）；（2）掺混肥料；（3）有机—无机复混肥料

（二）磷肥（1）过磷酸钙；（2）钙镁磷肥；（3）钙镁磷钾肥；（4）肥料级磷酸氢钙

21农药（1）粉剂；（2）颗粒剂；（3）可深粉剂；（4）可湿性粉剂；（5）母药；（6）片剂；（7）乳油；（8）水剂；（9）悬浮剂；（10）悬乳剂；（11）悬浮种衣剂；（12）烟粉粒剂；（13）烟片剂；（14）原药；（15）原药浓剂

22橡胶制品：（一）钢丝增强液压橡胶软管和软管组合件（1）钢丝增强液压橡胶软管和软管组合件；（2）钢丝缠绕增强外覆橡胶的液压橡胶软管和软管组合件；（3）计量分配燃油用橡胶软管及软管组合件；（4）家用煤气软管；（5）旋转钻井设备 水龙带；（6）焊接及切割用橡胶软管 氧气橡胶软管；（7）焊接及切割用橡胶软管 乙炔橡胶软管

（二）阻燃输送带（1）PVC型阻燃带；（2）PVG型阻燃带；（3）ST型阻燃带；（4）YBY型阻燃带；（5）MDC型阻燃带

（三）汽车V带（1）包边V带；（2）切边V带；（3）汽车多楔带；（4）汽车同步带

（四）橡胶密封制品（1）O形橡胶密封圈；（2）旋转轴唇形密封圈；（3）汽车液压制动橡胶皮碗；（4）汽车制动气室橡胶隔膜；（5）往复运动橡胶密封圈；（6）止水带

23防喷器及防喷器控制装置（1）旋转防喷器；（2）环形防喷器；（3）闸板防喷器；（4）防喷器控制装置

24钻井悬吊工具（1）吊卡；（2）吊环；（3）钻井吊钳；（4）钻井卡瓦

25电热毯（1）控温型电热毯；（2）限温型电热毯；（3）调温型电热毯（4）电热垫；（5）电热褥垫

26助力车（1）电动自行车；（2）汽油机助力自行车；（3）其它类型的有国家标准或行业标准的助力自行车

27香精香料（1）天然香料单元；（2）生物技术香料单元；（3）合成香料单元；（4）香精单元(应用香精)

28眼镜：　（一）眼镜(1)光学眼镜片毛坯；（2）眼镜镜片（非树脂类）；（3）眼镜镜片（热塑型树脂类）；（4）眼镜镜片（热固型树脂类）；（5）眼镜镜片（车房片）；（6）眼镜架（金属类）；（7）眼镜架（塑料类）；（8）太阳镜；（9）老视镜（批量生产）；（10）护目镜其他眼镜产品

（二）验配眼镜验配眼镜

29预应力混凝土轨枕II型预应力混凝土枕

30预应力混凝土铁路桥简支梁（1）后张法预应力混凝土铁路桥箱型简支梁产品；（2）后张法预应力混凝土铁路桥T型简支梁产品；（3）先张法预应力混凝土铁路桥箱型简支梁产品；（4）先张法预应力混凝土铁路桥T型简支梁产品；（5）后张法部分预应力混凝土铁路桥箱型简支梁产品；（6）后张法部分预应力混凝土铁路桥T型简支梁产品；（7）先张法部分预应力混凝土铁路桥箱型简支梁产品；（8）先张法部分预应力混凝土铁路桥T型简支梁产品

31港口装卸机械（1）回转式浮式起重机；（2）非回转式浮式起重机；（3）臂式斗轮堆取料机（臂式斗轮取料机、臂式堆料机）；（4）门式斗轮堆取料机（门式斗轮取料机）；（5）圆形堆场斗轮堆取料机；（6）桥式斗轮取料机；（7）带式斗式提升机；（8）环链斗式提升机；（9）板链斗式提升机；（10）水平型埋刮板输送机；（11）垂直型埋刮板输送机；（12）Z型（含环型）埋刮板输送机；（13）港口吸粮机

32公路桥梁支座（1）公路桥梁板式橡胶支座；（2）公路桥梁盆式橡胶支座；（3）公路桥梁球型支座

33机动车制动液（1）HZY3机动车制动液；（2）HZY4机动车制动液；（3）HZY5机动车制动液

34特种劳动防护用品（1）安全帽；（2）安全带；（3）安全网；（4）过滤式防毒面具——面罩；（5）过滤式防毒面具——滤毒罐（盒）；（6）防尘口罩；（7）焊接眼面护具——面罩；（8）焊接眼面护具——滤光片及眼镜；（9）防冲击眼护具；（10）阻燃防护服；（11）防酸工作服；（12）防静电工作服；（13）防静电鞋导电鞋；（14）保护足趾安全鞋（靴）；（15）防刺穿鞋；（16）电绝缘鞋；（17）胶面防砸安全靴；（18）耐酸碱皮鞋；（19）耐酸碱胶靴；（20）耐酸碱塑料模压靴；（21）耐油防护鞋；（220耐酸（碱）手套；（23）带电作业用绝缘手套

35钢管脚手架扣件（1）钢管脚手架扣件Φ48、Φ51；（2）钢板冲压扣件Φ48

36建筑外窗（1）铝合金窗；（2）塑料窗；（3）彩色涂层钢板窗

37建筑卷扬机建筑卷扬机

38摩托车乘员头盔（1）全盔；（2）半盔

39水泥（1）通用水泥；（2）特种水泥；（3）熟料

40混凝土输水管（1）自应力混凝土输水管；（2）预应力混凝土管(一阶段管)；（3）预应力混凝土管(三阶段管)；（4）预应力钢筒混凝土管；（5）混凝土低压排水管；（6）钢筋混凝土排水管；（7）顶进施工法用钢筋混凝土排水管；（8）玻璃纤维缠绕增强热固性树脂夹砂压力管；（9）玻璃纤维增强塑料夹砂管；（10）离心浇注玻璃纤维增强不饱和聚酯树脂夹砂管

41摩擦材料、非金属密封制品：　（一）摩擦材料（1）汽车用制动器衬片；（2）汽车用离合器面片；（3）汽车制动器总成；（4）汽车离合器从动盘总成；（5）摩托车和轻便摩托车制动蹄总成；（6）摩托车离合器；（7）工(农)业机械用摩擦材料；（8）石油钻机用刹车块；（9）烧结金属摩擦材料；（10）湿式（非金属类）摩擦材料；（11）工（农）业机械用离合器从动盘总成

（二）非金属密封制品产品（1）辊压法密封板；（2）抄取法密封板；（3）柔性石墨板；（4）聚四氟乙烯密封材料；（5）内燃机汽缸盖垫片；（6）缠绕式垫片；（7）非金属平垫片；（8）非金属复合垫片；（9）石棉密封填料；（10）聚四氟乙烯编织填料；（11）特种纤维编织填料；（12）石墨填料

42建筑防水卷材（1）石油沥青纸胎油毡、油纸；（2）石油沥青玻璃纤维胎油毡；（3）石油沥青玻璃布油毡；（4）铝箔面油毡；（5）沥青复合胎柔性防水卷材；（6）塑性体改性沥青防水卷材；（7）弹性体改性沥青防水卷材；（8）改性沥青聚乙烯胎防水卷材；（9）自粘橡胶沥青防水卷材；（10）自粘聚合物改性沥青聚酯胎防水卷材；（11）高分子防水材料 、片材；（12）再生胶油毡；（13）三元丁橡胶防水卷材；（14）氯化聚乙烯—橡胶共混防水卷材；（15）聚氯乙烯防水卷材；（16）聚化氯乙烯防水卷材；（17）非织造复合土工膜；（18）油毡瓦

43铜及铜合金管材换（1）热交换器用铜管；（2）散热用铜管；（3）空调与制冷用铜管；（4）内螺纹铜管；（5）铜水管和铜气管；（6）铜波导管；（7）铜毛细管；（8）焊接铜管；（9）压力表用铜管；（10）挤制铜管；（11）拉制（轧制）铜管；（12）气门嘴用铜管；（13）拉杆天线套管

44铝钛合金加工产品：（一）铝合金建筑型材（1）基材；（2）阳极氧化、着色型材；（3）电泳涂漆型材；（4）粉末静电喷涂型材；（5）氟碳漆喷涂型材；（6）隔热型材

（二）钛及钛合金加工产品（1）钛及钛合金锭；（2）钛及钛合金板材；（3）钛及钛合金带箔材；（4）钛及钛合金管；（5）换热器及冷凝器用钛及钛合金管；（6）钛及钛合金棒材；（7）钛及钛合金丝

45广播通信铁塔及桅杆（1）电视塔；（2）广播塔；（3）微波塔；（4）通信塔

46电力金具（1）可锻铸铁类；（2）锻压类；（3）铝铜铝类；（4）铸铁类

47输力线路铁塔（1）110kV；（2）220kV；（3）(330 kV)；（4）500kV；（5）750kV

48电力调度通讯设备：（一）电力线阻波器及结合滤波器（1）电力线阻波器；（2）结合滤波器

（二）电力线载波通信产品（1）全数字电力线载波机；（2）数字化电力线载波机；（3）模拟电力线载波机；（3）继电保护收发信机；（4）电力线信息传输装置

49水工金属结构产品1)平面定轮闸门；（2）平面滑动闸门；（3）平面链轮闸门；（4）弧形闸门；（5）人字闸门；（6）拦污栅；（7）压力钢管；（8）清污装置（每个单元又分为小、中、大、超大型四种）

50水文仪器（1）水（液、闸）位测量仪器；（2）水深测量仪器；（3）降水观测仪器；（4）流速/流量/流向测量仪器；（5）蒸发观测仪器

51 岩土工程仪器（1）密度试验仪器；（2）湿度试验仪器；（3）颗粒及矿物分析仪器；（4）渗透试验仪器；（5）压缩试验仪器；（6）强度试验仪器；（7）原位力学测试仪器；（8）土工试验数据采集系统设备；（9）变形观测仪器；（10）应力/应变观测仪器；（11）渗流观测仪器；（12）温度观测仪器；（13）动态观测仪器；（14）信号接收仪表；（15）大坝安全监测系统设备；（16）岩样制备设备；（17）岩样测试仪器；（18）岩体测试仪器；（19）现场原位观测仪器；（20）岩体自动监测系统设备

52制冷设备"（1）户用蒸汽压缩循环冷水(热泵)机组[名义制冷（热）量≤50kW]；（2）工商业用蒸汽压缩循环冷水(热泵)机组[名义制冷（热）量＞50kW]；（3） 热泵热水机；（4） 水源热泵机组；（5） 溴化锂吸收式冷（温）水机组；（6）单元式空气调节机；（7）多联式空调（热泵）机组；（8）屋顶式空气调节机组；（9）汽车用空调器①；（10）风机盘管机组；（11）组合式空调机组；（12）暖风机；（13）暖通、制冷空调用通风机；（14）制冷用阀门；（15）制冷用换热器；（16）制冷压缩机③；（17）容积式制冷压缩冷凝机组；（18）食品冷柜（额定总有效容积>500L）；（19）组合冷库用隔热夹芯板

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53救生设备（一）救生衣"

（1）救生衣（固有浮力芯材）；（2）气胀救生衣；（3）救生衣灯；（4）救生服"

（二）救生圈（未启动）（三）救生艇（未启动）

54抽油设备：（一）抽油机游梁式抽油机

（二）抽油杆及其接箍"（1）抽油杆（抽油杆短节、光杆、接箍和异径接箍）；（2）超高强度抽油杆；（3）空心抽油杆

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（三）抽油泵（1）组合泵筒管式抽油泵；（2）整筒抽油泵；（3）特种抽油泵

55燃气器具：（一）燃气热水器"（1）家用燃气快速热水器；（2）燃气快速采暖热水器；（3）燃气容积式热水器

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（二）燃气灶具（1）家用燃气灶具；（2）商用燃气灶具；（3）便携式丁烷气灶

（三）燃气调压器（箱）（1）瓶装液化石油气调压器；（2）城镇燃气调压器（箱）

56饲料粉碎机(1)饲料粉碎机；(2)饲草粉碎机；(3)铡草机；(4)青饲料切碎机；(5)组合机

57人民币伪钞鉴别仪(1)动态鉴别式人民币伪钞鉴别仪；(2)静态鉴别式人民币伪钞鉴别仪

58危险化学品：(一)化学试剂"

（1）通用试剂；（2）工作基准试剂"

(二)溶解乙炔溶解乙炔

(三)压缩、液化气体（1）永久性气体；（2）液化气体

（四）无机类（1）氰化物；（2）一级钡化合物；（3）六价铬化合物；（4）磷化合物；（5）氯酸盐；（6）溴酸盐；（7）硝酸盐；（8）氟化合物；（9）过氧化物；（10）硫化物；（11）连二亚硫酸钠（保险粉）；（12）二氧化硫；（13）硫磺；（14）五硫化二磷；（15）氯磺酸；（16）氢氧化钾；（17）高锰酸钾；（18）氯化锌；（19）三氯化铁；（20）水合肼；（21）亚硒酸钠；（22）一氧化铅；（23）硅酸铅；（24）金属钠

（五）氯碱"（1）氢氧化钠；（2）液氯；（3）盐酸

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（六）工业硝酸（1）浓硝酸；（2）稀硝酸

（七）染料中间体染料中间体

（八）硫酸硫酸

（九）民用硝化棉（1）涂料硝化棉；（2）赛璐珞硝化棉

（十）液体无水氨液体无水氨

（十一）危险化学品有机类（1）溶解乙炔；（2）环氧乙烷；（3）过氧乙酸；（4）有机胺；（50）卤化烃；（6）工业醇、醛、酮；（7）工业有机酸、酸、酐、脂；（8）醇胺；（9）硝基甲烷；（10）硫脲；（11）硝酸胍；（12）芳香烃；（13）酚；（14）甲醇；（150碳化钙

（十二）碳化钙（电石）碳化钙(电石)

（十三）涂料（1）清漆；（2）色漆；（3）辅助材料

59危险化学品包装物、容器（1）金属桶；（2）金属罐；（3）复合包装；（4）塑料包装罐体；（5）纸容器；（6）木容器；（7）玻璃容器

60棉花加工机械"（1） 锯齿轧花机；（2） 液压棉花打包机；（3） 籽棉清理机；（4） 皮棉清理机

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61防伪技术产品（一）防伪标识（1）全息防伪标识；（2）双卡防伪标识；（3）图形输出激光防伪标识；（4）微孔防伪标识；（5）印刷防伪标识；（6）隐形图文回归防伪标识；（7）图文揭露防伪标识；（8）磁码防伪标识；（9）覆盖层防伪标识；（10）标记分布特性防伪标识；（11）其它产品单元

（二）防伪票证（1）防伪票据；（2）防伪证件、证书；（3）防伪票卡、证卡

（三）防伪材料（1）防伪纸；（2）防伪油墨；（3）防伪膜；（4）防伪线；（5）其它防伪材料

62无线广播电视发射设备（1）中波调幅广播发射机；（2）短波调幅广播发射机；（3）数字音频广播发射机（4）调频广播发射机（5）调频广播差转机（6）电视发射机（7）电视差转机（8）多路微波分配系统（9）C频段功率放大器（10）Ku频段功率放大器等产品。

63税控收款机　(一)税控收款机（1）税控机；（2）税控器；（3）税控打印机

(二)金融税控收款机金融税控收款机（用与银联卡、银行卡、IC卡）

64加工食品

65直接接触食品的材料等相关产品:　(一)工业和商业电热食品加工设备（1） 商用箱式电烤炉；（2） 商用旋转电烤炉；（3） 商用热风电烤炉；（4） 商用烧烤炉；（5 ）商用电炸炉；（6） 商用电热铛 ；（7） 商用电平锅 ；（8） 商用电炉灶 ；（9 ）商用电蒸锅 ；（10） 商用电煮锅 ；（11） 商用电开水器；（1 工业电烤炉

(二)餐具洗涤剂（1）餐具（含果蔬）用洗涤剂；（2）食品工业用（含复合主剂）洗涤剂

(三)食用酒精食用酒精

(四)食品添加剂（1）酸度调节剂；（2）抗结剂；（3）抗氧化剂；（4）漂白剂；（5）膨松剂；（6）着色剂；（7）护色剂；（8）乳化剂；（9）酶制剂；（10）增味剂；（11）面粉处理剂；（12）被膜剂；（13）水分保持剂；（14）营养强化剂；（15）防腐剂；（16）稳定和凝固剂；（17）甜味剂；（18）增稠剂；（19）其它

(五)压力锅（1）不锈钢压力锅；（2）铝压力锅

66化妆品(1)一般液态单元(2)膏霜乳液单元(3)粉单元(4)气雾剂及有机溶剂单元(5)蜡基单元(6)其它单元

包涵体染色的方法有哪些？原理是什么

就那植物来说吧！原理是一致的。方法不同。 1植物组织提取基因组DNA 一、材料 幼嫩叶子。 二、设备 移液器，冷冻高速离心机，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵，50ml离心管（有盖）及5ml和1.5ml离心管，弯成钩状的小玻棒。 三、试剂 1、提取缓冲液Ⅰ：100mmol/L Tris·Cl, pH8.0, 20mmol/L EDTA, 500mmol/L NaCl, 1.5% SDS。 2、提取缓冲液Ⅱ：18.6g葡萄糖，6.9g二乙基二硫代碳酸钠，6.0gPVP，240ul巯基乙醇，加水至300ml。 3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇 4、 RnaseA母液 5、其它试剂：液氮、异丙醇、TE缓冲液，无水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc。 四、操作步骤： 1. 在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液Ⅰ, 60℃水浴预热。 2. 幼苗或叶子5-10g, 剪碎, 在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中, 剧烈摇动混匀, 60℃水浴保温30-60分钟(时间长,DNA产量高), 不时摇动。 3. 加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液, 颠倒混匀(需带手套, 防止损伤皮肤)，室温下静置5-10分钟, 使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。 4. 室温下5000rpm离心5分钟。 5. 仔细移取上清液至另一50ml离心管,加入1倍体积异丙醇,混匀,室温放置片刻即出现絮状DNA沉淀。 6. 在1.5ml eppendorf中加入1ml TE。用钩状玻璃棒捞出DNA絮团,在干净吸水纸上吸干,转入含TE的离心管中,DNA很快溶解于TE。 7. 如DNA不形成絮状沉淀,则可用5000rpm离心5分钟, 再将沉淀移入TE管中。这样收集的沉淀,往往难溶解于TE,可在60℃水浴放置15分钟以上，以帮助溶解。 8. 将DNA溶液3000rpm离心5分钟, 上清液倒入干净的5ml离心管。 9. 加入5μl RNaseA(10μg/μl), 37℃ 10分钟, 除去RNA(RNA对DNA的操作、分析一般无影响，可省略该步骤）。 10. 加入1/10体积的3mol/L NaAc及2×体积的冰乙醇,混匀,-20℃放置20分钟左右,DNA形成絮状沉淀。 11. 用玻棒捞出DNA沉淀,70%乙醇漂洗,再在干净吸水纸上吸干。 12. 将DNA重溶解于1ml TE, -20贮存。 13. 取2μl DNA样品在0.7% Agarose胶上电泳, 检测DNA的分子大小。同时取15μl稀释20倍, 测定OD260/OD280, 检测DNA含量及质量。 [注意] 5g样品可保证获得500μg DNA, 足供RFLP、PCR等分析之用。

化学助剂行业不属于限制和禁止行业说明？

包涵体染色的方法有哪些？原理是什么

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包涵体染色的方法有哪些？原理是什么

蛋白包涵体-溶解原理及方法2009年03月15日；维持包涵体内蛋白质结构的作用力是分子内的作用力，；1.遵循标准；包涵体蛋白质的溶解同样是一个工艺的关键的步骤；(1)快速溶解的动力学；；(2)与蛋白质的结合是可逆的；；(3)对细胞碎片的分离方法没有干扰作用；；(4)对温度没有依赖作用；；(5)抑制蛋白质酶的降解作用；；(6)与蛋白质的氨基没有化学修饰作用；；

维持包涵体内蛋白质结构的作用力是分子内的作用力，这种作用力也维持天然蛋白质的稳定性的结构。先前有报道这种作用力是共价键结合的，但是，现在趋向于一致，就是维持包涵体内部的蛋白质的紧密的结构的是非共价键的作用力。二硫键，无论是正确的还是错误的二硫键，在维持内部蛋白质的紧密的结构中都没有发挥直接的作用。最经常的获得活性蛋白质的第一步是溶解这些包涵体蛋白质，溶解液是使这些包涵体蛋白质完全变性的成分，当蛋白质被溶解以后，则进入到蛋白质的体外折叠的过程。

1. 遵循标准

包涵体蛋白质的溶解同样是一个工艺的关键的步骤。溶剂的选择会影响后续的操作、最终的各种蛋白质的收率以及最终的成本，必须遵循以下的标准：

(1) 快速溶解的动力学；

(2) 与蛋白质的结合是可逆的；

(3) 对细胞碎片的分离方法没有干扰作用；

(4) 对温度没有依赖作用；

(5) 抑制蛋白质酶的降解作用；

(6) 与蛋白质的氨基没有化学修饰作用；

(7) 在可能的情况下，选择最低的溶解浓度和廉价的溶剂，并适于以后的复性方法。

2. 溶解包涵体的试剂

最经常使用溶解包涵体的试剂包括离液剂或者去垢剂。

最经常使用的溶解和制备蛋白质的离子型的离液剂最早于1969年Hatefi等人发展的离子型的去垢剂如SDS是另外一种溶解包涵体蛋白质和膜蛋白质的试剂，但是一般不用来大规模的生产，而是用来定性。除了强酸、强碱和利用有机溶剂来提取疏水性很强的蛋白质以外，其他的变性方法如非可逆的共价修饰在工业的大规模生产中很少用到。一旦蛋白质被溶解，蛋白质中的巯基很容易快速地氧化并形成共价的聚集体或者分子内错配的二硫键，然后这些蛋白质就不能再进行折叠。为了防止氧化，可以使这些基团或者利用缓冲液中含有低分子量的疏基试剂保持在还原的状态或形成磺酸盐或者形成混合的二硫键。

（1）去垢剂

去垢剂是一种最经济的溶解包涵体蛋白质的方法，一个最大的优点是溶解的蛋白质有可能保持全部的生物活性，说明在此条件下保持了蛋白质的四级结构。最重要的是稀释以后蛋白质的聚集比其它溶剂生成的很

少。阳离子型、阴离子型的和非离子型的去垢剂都可以使用，使用时的浓度一般高于去垢剂的临界胶束浓度（CMC ），通常是0.5-5%。

SDS仅仅在大量生产牛生长激素、干扰素和白介素-2中用到。SDS由于具有较低的临界胶束浓度（CMC）而使得结合到蛋白质分子上的SDS比较难于除去。由于N-十二烷肌氨酸它的CMC比SDS高0.4%，也被用来溶解包涵体蛋白质并可用稀释的方法使蛋白质复性，残余的去垢剂可以使用阴离子交换色谱或者超滤的方法除去。这种去垢剂是一种比较温和的去垢剂，可以选择性地溶解一些包涵体，但是不能溶解完全的变性的蛋白质的聚集体和大肠杆菌的内膜的蛋白质分子。使用去垢剂一个主要的缺点是对以后的纯化和复性的步骤的干扰，去垢剂结合到蛋白质上的强度大离子交换色谱复性蛋白质小不同，比较难于除去，并干扰离子交换和疏水相互作用色谱的过程，在变性的浓度时超滤膜会吸附这些变性剂。所以复性后需要尽量洗涤这些去垢剂，也可以使用环状糊精链状糊精或者环状淀粉从复性缓冲液中提取去垢剂。

一个不容忽视的问题是去垢剂可以溶解全部的膜蛋白质中的蛋白质酶，这些蛋白质酶的活性在去垢剂的存在的情况下被活化，可能造成溶解和复性过程的收率的降低。蛋白质复性的收率可以通过以下的方法来提高： a) 先期使用可以溶解膜蛋白质但是不溶解包涵体蛋白质的溶剂尽量洗涤包涵体蛋白质；

b) 包涵体的含有的菌体碎片被完全除去；

c) 溶解包涵体的液体中含有蛋白质酶的抑制剂，如EDTA，苯甲基磺酰氟（PMSF ）等 。

（2）离液剂

其它的离液剂也被用来溶解包涵体蛋白质，最主要的溶解包涵体蛋白质的离液剂是盐酸胍和尿素，这是最经常使用的溶解试剂，一般情况下选择6-8mo1/L的浓度，蛋白质浓度在1-10mg/mL。

在溶解色氨酸合成酶A的过程，发现阳离子的溶解能力顺序是Gdm+ >Li+ >K+ >Na+，阴离子的顺序是SCN- >I- >Br- >Cr-。一些离液剂由于它们的溶液比盐酸胍和尿素有更高的密度和黏度而不适合用于溶解包涵体，因为利用离心和色谱分离起来比较困难。

为了溶解包涵体蛋白质需要的尿素或者盐酸胍的浓度根据蛋白质的不同而不同。如果蛋白质天然形态需要溶解的变性剂的浓度不能获得，则在溶解包涵体时需要首先确定离液剂的浓度。

盐酸胍由于比较贵，所以一般用来溶解一些附加值比较高的药物蛋白质分子，选择盐酸胍作为溶解试剂，是因为盐酸胍是一种比脲更为强烈的变性剂，甚至可以溶解脲所不能溶解的包涵体；尿素，由于可能被自发的形成的氰酸盐或者已有的氰酸盐的污染，特别是在碱性环境中，从而造成蛋白质的自由的氨基被不可逆的修饰。消除此种影响的方法是用阴离子的缓冲系统如Tris-HCl溶解脲或者脲在使用之前利用阴离子交换色谱纯化，并且配制的溶解和复性的缓冲液在当天使用。脲溶液中影响蛋白质变性的因素与盐酸胍的不同。溶在脲中的蛋白质受到pH和离子强度的影响，从而影响电荷的蛋白质残基之间的电荷作用，但是由于盐酸胍含有高浓度的离子强度，所以这两个因素的影响很少。

（3）混合溶剂

一般情况下去垢剂并不联合使用，Lilly等人发现去垢剂和尿素的混合液有效的摩尔浓度较低。尿素和去垢

剂型的盐混合可以使蛋白质变性，但是尿素和非去垢剂的盐如氯化钠反而降低包涵体蛋白质的溶解性，所以要避免使用。

去垢剂结合其他的试剂或者溶解增强剂也被使用，发现尿素和乙酸，尿素和二甲亚枫，尿素和高pH等是比较有效的溶解包涵体蛋白质的方法。

高压（1-2kbar）、超声也可以溶解包涵体蛋白质，此时使用的溶解试剂浓度可以比较低，便于后续的复性步骤。

3. 极端pH

酸碱度也是比较廉价的有效的溶解包涵体的方法。最经常使用酸的是有机酸，浓度在5-80%之间。Gavif和Better使用低的（pH≤2.6）和高温（85℃ ）溶解抗真菌的重组蛋白质的肤段，低温和高PH需要溶解时间要长。Reddy和合作者也使用20%乙酸溶解一种麦芽糖结合的蛋白质。但是，同样的一些不可逆的修饰作用或者酸降解会在极端pH下发生，所以此种方法并不是经常使用的溶解包涵体的方法。

高pH（≥12）也被用来溶解生长激素和原胰岛素。在高pH下一些蛋白质同样可能发生非可逆的变性，原因在于半胱氨酸在碱性条件下的脱硫过程。所以这种方法尽管比较简单、廉价，同样仅仅用于一些特定的蛋白质，特别对于药用蛋白质一般不采用这种方法。

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摘要 基因重组蛋白在大肠杆菌中表达时，由于表达量高，往往形成无生物活性的包涵体。包涵体必须经过变性和复性的过程才能获得有活性的重组蛋白。如何提高基因重组蛋白质的复性率，是生物工程技术的一个研究热点。对近年来的重组蛋白质的复性方法做一评述，为研究蛋白质折叠以及复性技术的进一步应用提供依据。

关键词 重组蛋白 包涵体 复性 二硫键

到目前为止，人们表达的重组蛋白质已有4000多种，其中用E.coli表达的蛋白质要占90%以上，尽管基因重组技术为大规模生产目标蛋白质提供了崭新的途径，然而人们在分离纯化时却遇到了意想不到的困难，即这些蛋白质在E.coli中绝大多数是以包涵体形式存在，重组蛋白不仅不能分泌到细胞外，反而在细胞内聚集成没有生物活性的直径约0.1~3.0μm的固体颗粒[1]。自从应用大肠杆菌体系表达基因工程产品以来，人们就一直期望得到高活性、高产量的重组蛋白。不可溶、无生物活性的包涵体必须经过变性、复性才能获得天然结构以及生物活性，因此应该选择一个合适的复性过程来实现蛋白质的正确折叠，获得生物活性，近年来的研究可以使复杂的疏水蛋白、多结构域蛋白、寡聚蛋白、含二硫键蛋白在体外成功复性。

包涵体形成的原因

重组蛋白在宿主系统中高水平表达时，无论是原核表达体系或真核表达体系甚至高等真核表达体系，都会形成包涵体[2]。主要因为在重组蛋白的表达过程中，缺乏某些蛋白质折叠过程中需要的酶和辅助因子，或环境不适，无法形成正确的次级键等原因形成的[3]。

1、 表达量过高，研究发现在低表达时很少形成包涵体，表达量越高越容易形成包涵体。原因可能是合成速度太快，以至于没有足够的时间进行折叠，二硫键不能正确配对，过多的蛋白间的非特异性结合，蛋白质无法达到足够的溶解度等。

2、 重组蛋白的氨基酸组成，一般说来含硫氨基酸越多越容易形成包涵体。

3、 重组蛋白所处的环境：发酵温度高或胞内pH接近蛋白的等电点时容易形成包涵体。

4、 重组蛋白是大肠杆菌的异源蛋白，由于缺少真核生物中翻译后修饰所需酶类，致使中间体大量积累，容易形成包涵体沉淀。

5、 有报道认为，丰富的培养基有利于活性蛋白质的表达，当培养条件不佳时，容易形成包涵体。

减少包涵体形成的策略

1、 降低重组菌的生长温度，降低培养温度是减少包涵体形成的最常用的方法，较低的生长温度降低了无活性聚集体形成的速率和疏水相互作用，从而可减少包涵体的形成[4]。

2、 添加可促进重组蛋白质可溶性表达的生长添加剂，培养E.coli时添加高浓度的多醇类、蔗糖或非代谢糖可以阻止分泌到周质的蛋白质聚集反应，在最适浓度范围内添加这些添加剂不会影响细胞的生长、蛋白质的合成或运输，其它促重组蛋白质可溶性表达的生长添加剂还有乙醇（诱导热休克蛋白的表达）、低分子量的巯基或二硫化合物（影响细胞周质的还原态，从而影响二硫键的形成）和NaCl[5]。

3、 供给丰富的培养基，创造最佳培养条件，如供氧、pH等。

包涵体的分离及溶解

对于生物制药工业来说，包涵体的形成也是有利的，不仅可获得高表达、高纯度的重组蛋白质，还可避免细胞水解酶对重组蛋白质的破坏。由于包涵体是蛋白质聚集而成的致密颗粒，分离的第一步是对培养收集的细胞进行破碎，比较有效的方法是高压匀浆结合溶菌酶处理，然后5000~20000g离心，可使大部分包涵体沉淀，与可溶性蛋白分离，接着，包涵体沉淀需用去污剂（Triton X-100或脱氧胆酸钠）和低浓度变性剂（2mol/L尿素或盐酸胍等）洗涤除去脂类和膜蛋白，这一步很重要，否则会导致包涵体溶解和复性的过程中重组蛋白质的降解[6、7、8]。

包涵体的溶解必须用很强的变性剂，如8mol/L尿素、6~8mol/L盐酸胍，通过离子间的相互作用破坏包涵体蛋白间的氢键而增溶蛋白。其中尿素的增溶效果稍差，异氰盐酸胍最强；去污剂，如SDS[7]，可以破坏蛋白内的疏水键，可以增溶几乎所有的蛋白，但由于无法彻底去除而不允许用在制药行业中；酸，如70%甲酸[9]，可以破坏蛋白的次级键从而增溶蛋白，这种方法只适合少数蛋白质。对于含有半胱氨酸的蛋白，在增溶时应加入还原剂（如DTT、GSH、β-ME）打开蛋白质中所有二硫键，对于目标蛋白没有二硫键的有时也应使用还原剂，为含二硫键的杂蛋白会影响包涵体的溶解，同时还应加入金属螯合剂，如EDTA或EGTA，用来螯合Cu2+、Fe3+等金属离子与还原状态的巯基发生氧化反应[10]。

蛋白质的折叠机理

包涵体蛋白在变性剂作用下，为可溶性伸展态，在变性剂去除或浓度降低时，就会自发的从变性的热不稳

状态向热力学稳定状态转变，形成具有生物活性的天然结构[11]。然而在去除变性剂的同时，重组蛋白质在体外折叠，分子间存在大量错误折叠和聚合，复性效率往往很低，包涵体蛋白折叠复性的效率实际上取决于正确折叠过程与聚集过程之间的竞争[1]。对于蛋白质的折叠机制，目前有多种不同的假设，但很多学者认为有一个“熔球态”的中间状态，在“熔球态”中，蛋白质的二级结构已经基本形成，其空间结构也初具规模，再做一些局部调整就可形成正确的立体结构，总之，蛋白质的具体步骤可用下式描述[12、13、14]：

伸展态→中间体→后期中间体→天然态体→聚集体

在折叠反应中，从伸展态到中间体的速度是非常快的，只需要几毫秒，但从中间体转变为天然态的过程比较缓慢，是一个限速过程。聚集过程与复性过程相互竞争，故而应尽量避免聚集体的产生。一般认为，蛋白质在复性过程中涉及两种疏水作用，一是分子内的疏水相互作用，可促进蛋白质正确折叠；一是部分折叠的肽链分子间的疏水相互作用，在复性过程中，部分折叠的中间体的疏水簇外露，分子间的疏水相互作用会导致蛋白质聚集。蛋白质的立体结构虽然由其氨基酸的顺序决定，然而伸展肽链折叠为天然活性结构的过程还受到周围环境的影响，如温度、pH值、离子强度、复性时间等因素的影响。

提高重组蛋白质折叠复性的方法

一个有效的、理想的折叠复性方法应具备以下几个特点：活性蛋白质的回收率高；正确复性的产物易于与错误折叠蛋白质分离；折叠复性后应得到浓度较高的蛋白质产品；折叠复性方法易于放大；复性过程耗时较少[15]。

1、 透析、稀释和超滤复性法：这三种方法是最传统也是应用最普遍的蛋白质折叠复性方法，复性活性回收率低，而且难于与杂蛋白分离。透析法耗时长，易形成无活性蛋白质聚集体；超滤法在膜上聚集变性，易造成膜污染；稀释法处理量太大，不利于工业放大[16]。

2、 高蛋白浓度下的复性方法：一个成功的复性过程在于能够在高蛋白浓度下仍能得到较高的复性率。一个方法是把变性蛋白缓慢连续或不连续地加入到复性液中[17]。在两次蛋白加入之间，应有足够的时间间隔使蛋白质折叠通过了易聚集的中间体阶段。这是由于完全折叠的蛋白通常不会与正在折叠的蛋白一起聚集。第二种方法是用温度跳跃策略[4]。变性蛋白在低温下复性折叠以减少聚集，直到易聚集的中间体大都转化为不易聚集的后期中间体后，温度快速升高来促进后期中间体快速折叠为蛋白的天然构象。第三种方法是复性在中等的变性剂浓度下进行[18]，变性剂浓度应高到足以有效防止聚集，同时又必须低到能够引发正确复性。

3、 添加促进剂的复性方法：包涵体蛋白质折叠复性促进剂的促进作用可以分为：稳定正确折叠蛋白质的天然结构、改变错误折叠蛋白质的稳定性、增加折叠复性中间体的溶解性、增加非折叠蛋白质的溶解性。通常使用的添加剂有：a、共溶剂：如PEG6000~20000，通过与中间体特异的形成非聚集的复合物，可以阻止蛋白质分子间的相互碰撞机会，减少蛋白质的聚集；b、去污剂及表面活性剂：如Trition X-100、CHAPs、磷脂、磺基甜菜碱等对蛋白质复性有促进作用，但它们能与蛋白质结合，很难去除；c、氧化-还原剂：对于含有二硫键的蛋白，复性过程中应加入氧化还原体系，如GSH/GSSG、DTT/GSSG、DTE/GSSG等，氧化还原系统通过促进不正确形成的二硫键快速交换反应，提高了正确配对的二硫键的产率[19]；d、小分子的添加剂：如盐酸胍或尿素、烷基脲、碳酸酰胺类等，都可阻止蛋白聚集，它们的作用可能为：稳定蛋白的活性状态、降低非正确折叠的稳定性、增加折叠中间体的稳定性、增加解折叠状态的稳定性。e、0.4~0.6M L-Arg：L-Arg能使得不正确折叠的蛋白质结构以及不正确连接的二硫键变得不稳定，使折叠向正确方向进行，可大幅度地提高包涵体蛋白质的折叠效率。f、添加分子伴侣和折叠酶：分子伴侣是指能够结合和稳定

近日，江苏省人民政府办公厅公布了《江苏省化工产业结构调整限制、淘汰和禁止目录》(2020年本)，促进化工产业结构调整和优化升级。

限制类项目13大类，包括 染料、染料中间体、有机颜料、印染助剂生产装置、高毒、高残留以及对环境影响大的农药原药，1000万吨/年以下常减压装置等。

目录要求限制类仅限于技术改造，不得新增产能。新增产能项目，项目核准备案机关不予核准或备案。

淘汰类项目18大类，分为11类落后工艺和装置、7类落后产品。淘汰类需立即淘汰或限期(2020年12月31日前或证照到期前)淘汰。

江苏化工项目新红线，禁止5大类，限制13大类，淘汰18大类

值得注意的是，禁止类目录是根据国务院江苏安全生产专项整治督导组指出的有关问题，在江苏省委办公厅、省政府办公厅印发的《关于加快全省化工钢铁煤电行业转型升级高质量发展的实施意见》、江苏省委办公厅、省政府办公厅印发的《江苏省化工产业安全环保整治提升方案》和《〈长江经济带发展负面清单指南〉江苏省实施细则(试行)》的基础上，对相关负面清单作补充完善。

禁止类共有5大类，包括：

*设立新的化工园区，设立新的化工园区外化工企业，化工园区内环境基础设施不完善或长期不能稳定运行企业的新改扩建化工项目。

* 新(扩)建农药、医药和染料中间体化工项目。

* 新增光气生产装置和生产点。

* 新建《危险化学品名录》所列剧毒化学品、《优先控制化学品名录》所列化学品生产项目。

* 新增农药原药(化学合成类)生产企业。

目录特别指出，禁止类是指在重点地区、特定类别不得建设。属于国家、省鼓励发展的战略性新兴产业、重点支持的高新技术领域、重大科技攻关项目，或配套本省电子信息、高端装备制造、生物医药、新材料等战略性新兴产业发展所需，或园区主产业链补链、延链和企业自身废弃物综合利用的项目除外。

江苏化工项目新红线，禁止5大类，限制13大类，淘汰18大类

江苏省化工产业结构调整限制、淘汰和禁止目录(2020年本)

第一类 限制类

1﹒1000万吨/年以下常减压、150万吨/年以下催化裂化、100万吨/年以下连续重整(含芳烃抽提)、150万吨/年以下加氢裂化生产装置。

2﹒100万吨/年以下石脑油裂解制乙烯、20万吨/年以下丙烯腈、100万吨/年以下精对苯二甲酸、20万吨/年以下乙二醇、20万吨/年以下苯乙烯(干气制乙苯工艺除外)、10万吨/年以下己内酚胺、乙烯法醋酸、30万吨/年以下羰基合成法醋酸、天然气制甲醇、100万吨/年以下煤制甲醇生产装置，丙酮氰醇法甲基丙烯酸甲酯、粮食法丙酮/丁醇、氯醇法环氧丙烷和皂化法环氧氯丙烷生产装置，300吨/年以下皂素(含水解物)生产装置。

3﹒10万吨/年以下聚丙烯、20万吨/年以下聚乙烯、起始规模小于30万吨/年的乙烯氧氯化法聚氯乙烯、10万吨/年以下聚苯乙烯、20万吨/年以下丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物(ABS)、5万吨/年以下普通合成胶乳-羧基丁苯胶(含丁苯胶乳)生产装置，新建、改扩建氯丁橡胶类、丁苯热塑性橡胶类、聚氨酯类和聚丙烯酸酯类中溶剂型通用胶粘剂生产装置。

4﹒纯碱(井下循环制碱除外)、烧碱(废盐综合利用的离子膜烧碱装置除外)、硫磺制酸(单项金属离子≤100ppb 的电子级硫酸除外)、硫铁矿制酸、常压法及综合法硝酸、氢氧化钾生产装置。

5﹒三聚磷酸钠、六偏磷酸钠、三氯化磷、五硫化二磷、磷酸氢钙、氯酸钠、少钙焙烧工艺重铬酸钠、电解二氧化锰、碳酸钙、无水硫酸钠(盐业联产及副产除外)、碳酸钡、硫酸钡、氢氧化钡、氯化钡、硝酸钡、碳酸锶、白炭黑(气相法除外)、氯化胆碱生产装置。

6﹒黄磷、氰化钠，单线产能5千吨/年以下碳酸锂、氢氧化锂，干法氟化铝及单线产能2万吨/年以下无水氟化铝或中低分子比冰晶石生产装置。

7﹒以石油、天然气为原料的氮肥，采用固定层间歇气化技术合成氨，磷铵生产装置，铜洗法氨合成原料气净化工艺。

8﹒硫酸法钛白粉、铅铬黄、1万吨/年以下氧化铁系颜料、溶剂型涂料(鼓励类的涂料品种和生产工艺除外)、以煤焦油、重质苯为主要溶剂的沥青防腐涂料、含异氰脲酸三缩水甘油酯(TGIC)的粉末涂料生产装置。

9﹒ 染料、染料中间体、有机颜料、印染助剂生产装置(国家《产业结构调整指导目录》所列鼓励类及采用鼓励类技术的除外)。

10﹒氟化氢(HF，企业下游深加工产品配套自用、电子级及湿法磷酸配套除外)，新建初始规模小于20万吨/年、单套规模小于10万吨/年的甲基氯硅烷单体生产装置，10万吨/年以下(有机硅配套除外)和10万吨/年及以上、没有副产四氯化碳配套处置设施的甲烷氯化物生产装置，没有副产三氯甲烷配套处置设施的二氟一氯甲烷生产装置，可接受用途的全氟辛基磺酸及其盐类和全氟辛基磺酰氟(其余为淘汰类)、全氟辛酸(PFOA)，六氟化硫(SF6，高纯级除外)，特定豁免用途的六溴环十二烷(其余为淘汰类)生产装置。

11﹒斜交轮胎和力车胎(含手推车胎)，锦纶帘线， 5万吨/年以下钢丝帘线，再生胶(常压连续脱硫工艺除外)，橡胶塑解剂五氯硫酚，橡胶促进剂一硫化四甲基秋兰姆(TMTM)、二硫化四甲基秋兰姆(TMTD)、二苯胍(DPG)生产装置。

12﹒高毒、高残留以及对环境影响大的农药原药(包括氧乐果、水胺硫磷、甲基异柳磷、甲拌磷、特丁磷、杀扑磷、溴甲烷、灭多威、涕灭威、克百威、敌鼠钠、敌鼠酮、杀鼠灵、杀鼠醚、溴敌隆、溴鼠灵、肉毒素、杀虫双、灭线磷、磷化铝，有机氯类、有机锡类杀虫剂，福美类杀菌剂，复硝酚钠(钾)、胺苯磺隆、甲磺隆、五氯酚(钠)等)生产装置。

13﹒草甘膦、毒死蜱、三唑磷、百草枯、百菌清、阿维菌素、吡虫啉、乙草胺(甲叉法工艺除外)生产装置。

注：限制类仅限于技术改造，不得新增产能。新增产能项目，项目核准备案机关不予核准或备案。

江苏化工项目新红线，禁止5大类，限制13大类，淘汰18大类

第二类 淘汰类

(一)落后工艺和装置。

1﹒200万吨/年及以下常减压装置，采用明火高温加热方式生产油品的釜式蒸馏装置，废旧橡胶和塑料土法炼油工艺，焦油间歇法生产沥青，2.5 万吨/年及以下的单套粗(轻)苯精制装置，5万吨/年及以下的单套煤焦油加工装置。

2﹒乙炔法聚氯乙烯，10万吨/年以下的硫铁矿制酸和硫磺制酸，平炉氧化法高锰酸钾，隔膜法烧碱生产装置(作为废盐综合利用的可以保留)，平炉法和大锅蒸发法硫化碱生产工艺，芒硝法硅酸钠(泡花碱)生产工艺，间歇焦炭法二硫化碳工艺。

3﹒单台产能5000吨/年以下和不符合准入条件的黄磷生产装置，有钙焙烧铬化合物生产装置，单线产能3000吨/年以下普通级硫酸钡、氢氧化钡、氯化钡、硝酸钡生产装置，产能1万吨/年以下氯酸钠生产装置，电石炉，高汞催化剂(氯化汞含量6.5%以上)和使用高汞催化剂的乙炔法聚氯乙烯生产装置，使用汞或汞化合物的甲醇钠、甲醇钾、乙醇钠、乙醇钾、聚氨酯、乙醛、烧碱、生物杀虫剂和局部抗菌剂生产装置，氨钠法及氰熔体氰化钠生产工艺。

4﹒单线产能1万吨/年以下三聚磷酸钠、5000吨/年以下六偏磷酸钠、5000吨/年以下三氯化磷、3万吨/年以下饲料磷酸氢钙、5000吨/年以下工艺技术落后和污染严重的氢氟酸、5000吨/年以下湿法氟化铝及敞开式结晶氟盐生产装置。

5﹒单线产能3000吨/年以下氰化钠(100%氰化钠)、1万吨/年以下氢氧化钾、1.5万吨/年以下普通级白炭黑、2万吨/年以下普通级碳酸钙、10万吨/年以下普通级无水硫酸钠(盐业联产及副产除外)、3000吨/年以下碳酸锂和氢氧化锂、2万吨/年以下普通级碳酸钡、1.5万吨/年以下普通级碳酸锶生产装置。

6﹒半水煤气氨水液相脱硫、天然气常压间歇转化工艺制合成氨、一氧化碳常压变化及全中温变换(高温变换)工艺、没有配套硫磺回收装置的湿法脱硫工艺，没有配套建设吹风气余热回收、造气炉渣综合利用装置的固定层间歇式煤气化装置，没有配套工艺冷凝液水解解析装置的尿素生产设施。

7﹒用火直接加热的涂料用树脂、四氯化碳溶剂法制取氯化橡胶生产工艺，100吨/年以下皂素(含水解物)生产装置，盐酸酸解法皂素生产工艺及污染物排放不能达标的皂素生产装置，铁粉还原法工艺。

8﹒50万条/年及以下的斜交轮胎和以天然棉帘子布为骨架的轮胎、1.5万吨/年及以下的干法造粒炭黑(特种炭黑和半补强炭黑除外)、3亿只/年以下的天然胶乳安全套，橡胶硫化促进剂N-氧联二(1,2-亚乙基)-2-苯并唑次磺酰胺(NOBS)和橡胶防老剂D生产装置。

9﹒氯氟烃(CFCs)、含氢氯氟烃(HCFCs，作为自身下游化工产品的原料且不对外销售的除外)，用于清洗的1,1,1-三氯乙烷(甲基氯仿)，主产四氯化碳(CTC)、以四氯化碳(CTC)为加工助剂的所有产品，以PFOA为加工助剂的含氟聚合物、含滴滴涕的涂料(根据国家履行国际公约总体计划要求进行淘汰)。

10﹒敞开式无废气收集、回收、净化设施的胶粘剂、涂料、油墨生产装置。

11﹒钠法百草枯生产工艺，敌百虫碱法敌敌畏生产工艺，小包装(1公斤及以下)农药产品手工包(灌)装工艺及设备，雷蒙机法生产农药粉剂，以六氯苯为原料生产五氯酚(钠)装置。

(二)落后产品。

1﹒改性淀粉、改性纤维、多彩内墙(树脂以硝化纤维素为主，溶剂以甲苯、二甲苯等苯类溶剂为主的O/W型涂料)、氯乙烯-偏氯乙烯共聚乳液外墙、焦油型聚氨酯防水、水性聚氯乙烯焦油防水、聚乙烯醇及其缩醛类内外墙(106、107涂料等)、聚醋酸乙烯乳液类(含乙烯/醋酸乙烯酯共聚物乳液)外墙涂料。

2﹒有害物质含量超标准的内墙、溶剂型木器、玩具、汽车、外墙涂料，含双对氯苯基三氯乙烷、三丁基锡、全氟辛酸及其盐类、全氟辛烷磺酸、红丹等有害物质的涂料。

3﹒在还原条件下会裂解产生24种有害芳香胺的偶氮染料(非纺织品用的领域暂缓)、九种致癌性染料(用于与人体不直接接触的领域暂缓)。

4﹒含苯类、苯酚、苯甲醛和二(三)氯甲烷的脱漆剂，立德粉，聚氯乙烯建筑防水接缝材料(焦油型)， 107胶，瘦肉精，多氯联苯(变压器油)。

5﹒软边结构自行车胎，以棉帘线为骨架材料的普通输送带和以尼龙帘线为骨架材料的普通V带，轮胎、自行车胎、摩托车胎手工刻花硫化模具。

6﹒高毒高风险农药产品：六六六、二溴乙烷、丁酰肼、敌枯双、除草醚、杀虫脒、毒鼠强、氟乙酰胺、氟乙酰钠、二溴氯丙烷、治螟磷(苏化203)、磷胺、甘氟、毒鼠硅、甲胺磷、对硫磷、甲基对硫磷、久效磷、硫环磷(乙基硫环磷)、福美胂、福美甲胂及所有砷制剂、汞制剂、铅制剂、10%草甘膦水剂，甲基硫环磷、磷化钙、磷化锌、苯线磷、地虫硫磷、磷化镁、硫线磷、蝇毒磷、治螟磷、特丁硫磷、氯化苦、三氯杀螨醇、威菌磷、内吸磷、氯唑磷、氯磺隆。

7﹒根据国家履行国际公约总体计划要求进行淘汰的产品：氯丹、七氯、溴甲烷、滴滴涕、六氯苯、灭蚁灵、林丹、毒杀芬、艾氏剂、狄氏剂、异狄氏剂、硫丹、氟虫胺、十氯酮、α-六氯环己烷、β-六氯环己烷、多氯联苯、五氯苯、六溴联苯、四溴二苯醚和五溴二苯醚、六溴二苯醚和七溴二苯醚、六溴环十二烷(特定豁免用途为限制类)、全氟辛基磺酸及其盐类和全氟辛基磺酰氟(可接受用途为限制类)。

注：淘汰类需立即淘汰或限期(2020年12月31日前或证照到期前)淘汰。

江苏化工项目新红线，禁止5大类，限制13大类，淘汰18大类

第三类 禁止类

根据国务院江苏安全生产专项整治督导组指出的有关问题，在省委办公厅、省政府办公厅印发的《关于加快全省化工钢铁煤电行业转型升级高质量发展的实施意见》(苏办发〔2018〕32号)、省委办公厅、省政府办公厅印发的《江苏省化工产业安全环保整治提升方案》(苏办〔2019〕96号)和《〈长江经济带发展负面清单指南〉江苏省实施细则(试行)》(苏长江办发〔2019〕136号)的基础上，对相关负面清单作补充完善。

1﹒设立新的化工园区，设立新的化工园区外化工企业，化工园区内环境基础设施不完善或长期不能稳定运行企业的新改扩建化工项目。

2﹒新(扩)建农药、医药和染料中间体化工项目(国家产业结构调整指导目录所列鼓励类及采用鼓励类技术的除外，作为企业自身下游化工产品的原料且不对外销售的除外)。

3﹒新增光气生产装置和生产点。

4﹒新建《危险化学品名录》所列剧毒化学品、《优先控制化学品名录》所列化学品生产项目。

5﹒新增农药原药(化学合成类)生产企业。

注：禁止类指在重点地区、特定类别不得建设。属于国家、省鼓励发展的战略性新兴产业、重点支持的高新技术领域、重大科技攻关项目，或配套本省电子信息、高端装备制造、生物医药、新材料等战略性新兴产业发展所需，或园区主产业链补链、延链和企业自身废弃物综合利用的项目除外。

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