答：

（1）方法原理为了便于在同一消煮液中可以同时测定全氮、磷、钾，选用H2SO4-H2O2消煮法，操作简单快速，适用于成批花卉样品的分析，对氮、磷、钾的测定干扰较少，准确度较高。但应注意双氧水不宜过早加入，用量不可过多，应分次少量加入，加入后消煮温度不宜太高。

开氏法测定的是有机氮和铵态氮，不包括硝态氮。若花卉样品含有相当数量的硝态氮，则须先用含有水杨酸（或苯酚）的浓硫酸处理，使硝态氮与水杨酸（或苯酚与硫酸反应生成的酚磺酸）在室温下作用，生成硝基水杨酸；再用硫代硫酸钠或锌粉使硝基水杨酸还原为氨基水杨酸；然后进行开氏消煮，将全部有机氮（包括氨基水杨酸）转化为铵盐。（2）试剂配制①浓硫酸：93%～98%硫酸，不含氮。

②含水杨酸的硫酸：30克水杨酸（不含氮）溶于1升浓硫酸中。也可以改用含苯酚的浓硫酸，40克苯酚溶于1升浓硫酸。

浓硫酸贮存时必须防止空气中的氨污染。

③双氧水：30%双氧水：不含磷和氮。

④硫代硫酸钠：磨碎的Na2S2O3?5H2O。

⑤锌粉：极细的粉末状Zn（分析纯）。（3）水杨酸还原法制备消煮液（包括硝态氮的消煮液）

称样0.5000克放入100毫升开氏瓶或100毫升大消化管中，加水杨酸或苯酚的浓硫酸10毫升，浸润后在室温下（25℃左右）放置约30分钟，加入约1.5克Na2S2O3?5H2O或0.4克锌粉和10毫升水，放置约10分钟，待还原反应接近完成后，慢慢加热，慎防泡沫溢出。泡沫停止发生后即可加大火力，使溶液保持沸腾，同上在稍冷时分次加入双氧水，消煮，如此反复，至溶液清亮后再煮沸10分钟，取下冷却，全部转移至100毫升容量瓶中用水定容，摇匀。此待测液均可用于全氮、磷、钾的测定。同时做两份空白试验。（4）全氮的测定H2SO4-H2O2消煮液，可根据要求和条件选用蒸馏法、扩散法、靛酚蓝比色法或其他适当的方法测定氮。

①扩散法：用移液管吸取待测液1毫升（含NH4+-N 0.05～0.20毫克），放入扩散皿（外径9厘米）外室，内室中加入2毫升2% H3BO3溶液。盖上玻片，留出小孔，注入约10毫升1.0摩尔/升NaOH溶液，立即密闭，在25℃或15℃室温下放置1～2昼夜。在放置期间间歇地水平转动几次，以促进扩散完全。扩散完全后用0.01摩尔/升的标准酸滴定内室中吸收的氮。同时做空白实验，并用标准NH4+-N按相同的扩散法标定标准酸的浓度。

结果计算：

式中：N——标准酸的浓度（摩尔/升）；V——标准酸的净用量（已扣除空白试验的用量）（毫升）；0.014——氮的毫摩尔质量（克）；W——样品重量（克）。

②靛酚蓝比色法：

方法原理：待测液中的氨在碱性条件下与次氯酸盐和苯酚作用，生成可溶性的染料靛酚蓝，溶液的蓝色很稳定，其深浅与氨态氮含量成正比，可以用比色法测定。与纳氏比色法相比，靛酚蓝比色法的最大优点在于比色液是溶液，蓝色很稳定，再现性较高，对于连续流动自动化分析尤为适用。淀粉蓝法的灵敏度是纳氏法的6倍多，一般工作范围是0.03～0.5毫克/千克NH4＋-N。若浓度太高时，可以将已显色的溶液直接用水稀释后比色，不必另取待测液再稀释后重做。本法的缺点是显色剂不稳定，需冷藏后或当天配制；显色时间较长，显色的条件如pH等需控制好。

试剂配制：

①EDTA-甲基红溶液：16克EDTA二钠盐溶于500毫升水中，加入10毫升0.25%甲基红的60%酒精溶液。

②0.3摩尔/升 NaOH溶液。

③酚溶液：10克苯酚和100毫克硝普钠[NaFe（CN）5NO?2H2O]溶于1升水中，此试剂不稳定，应贮于棕色瓶中，放置4℃冰箱中，用时温热至室温。注意硝普纳有剧毒！

④次氯酸钠碱性溶液：10克NaOH，7.06克Na2HPO4?7H2O，31.8克Na3PO4?12H2O和10毫升5.25%NaClO（即含有效氯5%的漂白剂溶液）溶于1升水中，此溶液应与酚溶液同样保存。

⑤5毫克/千克NH4＋-N标准溶液：0.4717克烘干的（NH4）2SO4溶于水，定容1升。此为100毫升/千克NH4＋-N贮备标准溶液。分析时吸取贮备液5毫升，用水稀释至100毫升，即为5毫克/千克NH4＋-N标准溶液。

测定方法：将待测液Ⅰ或Ⅱ用水稀释10倍，用移液管吸取稀释后的溶液1毫升（含NH4＋-N 1.5～2.5毫克），放入50毫升容量瓶中，加入1毫升EDTA-甲基红溶液，用0.3摩尔/升 NaOH调节至pH≈6（即甲基红由红变为黄），再依次加入5毫升酚溶液和5毫升次氯酸钠溶液，摇匀，用水定容，放置1小时后，用1厘米比色杯在625纳米波长下比色，用空白试验消煮液调节吸收值的零点。

标准曲线的绘制：分别吸取0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0毫升5毫克/千克NH4＋-N标准液放入50毫升容量瓶中，各加1毫升稀释10倍的空白消煮液，同上中和及显色，测定吸收值后绘制标准曲线。标准系列浓度分别为0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5毫克/千克氮。

结果计算：根据查得样品比色液中NH4＋-N浓度（毫克/千克），计算样品的全N（%）：

式中稀释倍数：（100/w）×10×50＝50000/w，w是称样重，10000是把毫克/千克改用%表示时应除以的倍数。（5）全磷的测定样品经H2SO4-H2O2消煮后的待测液中的磷可以选用在H2SO4介质中进行的各种钼蓝比色法或者钒钼黄比色法测定。钒钼黄法的灵敏度较低，但适用于含磷较高的植株样品。

方法原理：待测液中的正磷酸盐与偏磷酸盐和钼酸盐在酸性条件下作用形成黄色的杂聚化合物钒钼酸盐，溶液的黄色很稳定，其深浅与磷的含量成正比，可以用比色法定量磷。

试剂配制：

①钒钼酸溶液：12.5克钼酸铵[（NH4）6Mo7O24?4H2O]溶于200毫升水中。另将0.625克NH4VO3（偏钒酸铵）溶于150毫升沸水中，冷却后加125毫升浓HNO3，再冷至室温，将钼酸铵溶液缓缓地注入钒酸铵溶液中，随时搅拌用水稀释至500毫升。

②6摩尔/升 NaOH溶液：24克NaOH溶于水稀释至100毫升。

③2，6-或2，4-二硝基酚指示剂：0.25克二硝基酚溶于100毫升水中（饱和），2，6-二硝基酚的变色范围是pH 2.4（无色）～4.0（黄色）。变色点是pH 3.1。

④50毫克/千克磷标准液：准确称取105℃下烘干的KH2PO4 0.2195克，溶于水，转移于1升容量瓶中，加水约至400毫升，加浓硫酸5毫升，用水定容。此为50毫克/千克P标准液，可长期保存使用。

测定方法：用移液管吸取待测液（Ⅰ或Ⅱ）20毫升（含P 0.05～1.0毫克），放入50毫升容量瓶中，加2滴二硝基酚指示剂，用6摩尔/升 NaOH中和至刚呈微黄色（约需10毫升），准确加入10毫升钒钼酸试剂，用水定容。同时做空白试验。放置15分钟后比色。波长450纳米（紫蓝色），1厘米光径的比色杯，以空白液调零点。

标准曲线的绘制：分别吸取0、2.5、5、7.5、10、15、20毫升50毫升/千克的磷标准液于50毫升容量瓶中，同上显色比色，绘制标准曲线。标准系列相应浓度为0、2.5、5、7.5、10、15、20毫克/千克磷。

结果计算：

式中稀释倍数：

（6）全钾的测定——火焰光度法方法原理：花卉植株组织中的全钾（和钠）以用2摩尔/升 NH4OAC-0.2摩尔/升 Mg（OAC）2浸提，直接用火焰光度计测定最为快速方便，结果也与用灰化植物样品的方法相同。

由于植物样品中铁、铝等的干扰比土壤分析中较小，所以用干灰化法或湿灰化法制得的待测液，也可以用火焰光度计法快速测定全钾，但用H2SO4-H2O2消煮时必须注意下列3点：

①溶液中的酸浓度对测定结果有影响（酸的存在将大大降低钠光的强度）。酸的浓度在0.02摩尔/升时对钾钠的测定基本无影响，一般不得超过0.25摩尔/升。

②标准液和待测液的组成要几乎相同，因为溶液的组成（包括酸碱和阴阳离子的浓度）的改变，对测定结果有影响，所以力求标准液的组成与待测液的一致。实践证明，植株消煮液经稀释后Cl－、SO42－、Ca2＋、Mg2＋等一般不超过干扰限度。

③可用缓冲液和内标法来提高准确度：测定钾时用的发射缓冲液是氯化钠、氯化钙、氯化镁的饱和溶液，可减少待测液中这些阳离子彼此间的干扰。用锂的内标法可以消除或减少激发情况不稳定和溶液组成改变所造成的误差。

测定方法：用移液管吸取植株样H2SO4-H2O2消煮液后又定容100毫升的待测液（Ⅰ）5毫升，放入25毫升容量瓶中，用水定容，此液中K＋的浓度为10～50毫克/千克，用火焰光度计直接测定。

标准曲线用0、5、10、20、30、40、50毫克/千克钾标准系列（各加有5毫升空白消煮液）在火焰光度计上测读后绘制。

计算样品的全K（%）。

采集花卉植株样品应注意哪些事项？

答：采集花卉植株样品具体的方法如下：

（1）田间植株样品的采集植株样品是指植株茎、叶、花等组织样品，此类样品通常用于诊断植株养分失调，研究植株体内养分变化动态及各生育期需肥规律等。用于前者，常采集与分析元素密切相关的具有指示意义的部位或器官进行分析；用于后者，则需采集全植株不同器官进行分析。

植株样品的采集方法如下：

①花园选择：在一个花卉主栽区的相同土类上，选择新建（或进入盛花期）、土壤肥力不同且长势和株龄一致的花园20～30个。要特别注意：

a.根据土壤测试值选择花园，保证所选择花园的土壤肥力水平应包括从低到高的所有范围。

b.所选择的花园花卉种类与品种完全相同，且管理模式、栽培密度及花卉生长健壮、个体大小基本一致等。

②花卉选择：在每一个花园选择有代表性的花卉10～20株（多年生幼龄花株或一二年生草本花卉可选择30～50株）进行标记。分为两组处理，即不施肥处理和常规施肥处理（可根据当地花农施肥习惯），于试验开始前（生长季开始）记录上一年花卉产量、质量等。每一株于4个不同方向上选择4个枝条做标记，用于记录新梢生长量。

在田间采样时，可像采集土样一样，按照一定路线进行，并在生产不受损失或少受损失的条件下，尽量多采集样品，同时还要遵循以下原则：

a.受病虫害或机械损伤的植株不宜采样。

b.当植株受高温或干旱灾害影响时不宜采样。

c.遮阴植株及有机肥料堆置处的植株不宜采样。

d.植物组织上面有较大尘埃及泥土时不宜采样。

e.茎叶部分特定部位的采样，一般应在植株生殖生长阶段初期或稍前期为宜。生理上过分幼嫩的组织，由于养分组成变化迅速，也不宜作为特定部位的采样。

f.一般不宜用种子作其营养状态的鉴定，但却可用其发芽的幼苗来检定一些营养元素的平衡状况。

g.生长不良的花园，植株取样数应多于正常花园的取样数。

h.植株采回后需要分不同器官测定（如分叶片、叶鞘、叶柄、茎、花朵、果实、种子等）时，应在采样后立即将其剪开，以免养分转移，影响测定结果。（2）花卉营养诊断叶片样品的采集叶分析的结果能否用于花卉营养诊断，在很大程度上取决于样品的采集和处理技术。因为取样时间、部位、数量以及样品处理方法都会显著地影响叶子中营养元素的含量。因此，只有准确的测定结果，才能得出正确的诊断结论，为合理施肥提供科学依据。

①样品的代表性：营养诊断的目的是希望通过对花卉叶片样品的分析，获得大量有效数据之后，来了解或推断整个花园或某个采样区的花卉营养状况。因此，采集的样品对整个花园或某一采样区必须具有代表性。

样品的代表性，与控制采样误差直接相关。从理论上讲，在一个采样区分布的采样点愈多，每个样品的株数愈多，样品的代表性就愈大，在一般情况下，采样区布点的多少和每个点选定株数的多少，取决于花园面积的大小、考察对象的复杂程度和试验要求的精密度等因素。花园面积愈大，对象愈复杂，则采样点数和每点株数都应增加。在理想的情况下，应该使采样点数和每点株数最少，而样品的代表性又是最大，使有限的人力、物力得到最高的工作效率。

在同一采样区，样点之间、样株之间仍然存在差异。为使样品能充分代表各植株的营养状况，必须多株采样。首先要保证有足够的样点数，每点有足够的株数，使之能代表采样区植株的营养状况，其次是要求采样误差控制到与室内分析所允许的误差较为接近。根据这两个要求，采样点数或每点采集株数，可根据其变异系数和要求的精密度，按下式算出来。

n=（CV/m）2式中：n——应布的采样点数或每点应采的株数；CV——变异系数（%）；m——试验所允许的最大误差（%）。

在一般情况下，室内分析误差一般不超过5%。如果试验所允许的最大误差不超过5%，假设株间的变异系数为20%，于是每个采样点应采的株数n为：

n=（20/5）2=16（株）

就是说在这个采样点上，需要从16株花卉植株上采样组成一个样品，才能满足上述要求。

②采样方法：

A.样株的选择：确定了每个采样点的株数后，还必须进一步选定株样。定株的原则是尽量做到均匀和随机。均匀分布可起到控制整个采样点的作用；随机定株则可避免出现误差的影响。据此，定株以锯齿形（Z形）或对角线为好。如设有小区重复，易用Z形取样法，每采样区各重复采5株；如不设重复，宜用对角线取样，每采样区25～50株。若以直线或梅花形定株，则常常易造成系统误差。由于耕作、施肥等农业技术措施往往是顺着某一方向进行的，如果采样的方向与农业操作的方向一致，则样株落在同一条件的可能性很大，这样就容易使采样的代表性降低。

为了某一特定目的（例如缺素和毒害症状诊断）而采样时，则应注意样株的典型性，并应同时选择附近有对比意义的典型正常植株作为对照，使分析结果能在可比的情况下说明问题。为此，选定的两组样株的采样部位和生育期必须相同，否则，比较分析就会失去作用。

B.采样部位：样株选定后，还要决定采样部位。研究证明，叶片组织中营养元素的浓度受枝梢类别、树冠位置等因素的影响。

例如在多年生木本花卉春梢叶龄相同的情况下，营养枝和开花结果枝叶片中元素含量有明显差异。从实际应用来看，采用营养性春梢中部的叶子为宜。叶片在花卉枝条上的位置不同，对其元素浓度的影响不甚稳定。因此，在采样时，枝条种类和叶片在枝条上的位置应统一。通常是从花卉枝条周围的目视高度（1.5～1.7米），在东南西北各个方向上，选择发育中庸的营养性春条，由顶端向下取第二至第三片叶一片（带叶柄）。在25～50株花卉枝条上采100～200片叶作为样品。

对于缺素引起的观果花卉生理病害的研究，也可根据病情发生的时期采取果实样品，一般取花卉枝条外围中部的果实或有病症的果实。

C.采样时期：花卉叶片中营养元素的浓度随采样时期和叶龄而有显著的变化。所以进行花卉营养诊断时，决定采样时期是特别重要的。研究证明，通常选择叶片元素含量的稳定期采集叶片进行分析较为适宜，亦即新枝停止生长，叶片矿质成分含量变动小为适期。采样适期因花卉种类、品种、气候条件等而异。例如月季叶分析采叶期定为春梢叶片4～7月龄。据此，多年生木本观果花卉营养诊断的采叶期以8～9月为宜。

采样时间亦应一致。叶片元素含量在一天中略有变化，一日之中以上午8～10采样为宜。因此时植株体的生理活动已趋活跃，地下部的根系吸收速率与地上部趋于上升的光合作用强度接近平衡。此时花卉组织中的营养贮量最能反映根系养分吸收与植株同化需要的相对关系，因此最具有营养诊断意义。

D.标签内容：样品信息包括采样序号、采样地点与地理位置、样品名称、花卉品种与部位、花卉长势及病虫害等。田间管理信息包括施肥浇水及农药使用、降雨情况等。同时还要注明采样人和采样时间。

如何制备花卉植株样品待测液？其特点如何？

答：花卉植株样品分析工作的可靠性，首先取决所采样品的代表性，否则分析工作将是徒劳的，甚至导致错误的判断，给生产或科研带来不必要的损失。应根据研究项目需要来确定采样部位。

花卉植株样品分析的可靠性受样品数量、采样方法及采样部位的影响，因此，采样时应注意：

一是代表性：采集样品应符合花卉群体生长状况，采样量尽可能足够多。

二是典型性：采样部位能够反映所要了解的情况。

三是适时性：根据研究目的，在不同生长发育阶段，定期采样。

对花卉的花朵、果实或种子采样要选品种特征典型的样株，才能比较各品种的品质。样株要注意挑选株龄、株型、生长势、载花（或载果）量等一致的正常株，幼或老和旺长的植株都缺乏代表性。在同一花园同一品种花卉中约选5～10株为代表，从每株的全部收获物中选取大、中、小和向阳或背阴的花朵或果实共10～15个组成平均样品，一般总重不少于0.5～1.5千克。

答：在进行元素分析之前，需将花卉样品制备成溶液。常用的方法有干灰化和湿灰化两种。

（1）干灰化法干灰化法的优点是操作简单，制备溶液过程中的污染几率较少。硼和钼以干灰化为好。四苯硼钠法测定钾时也以干灰化最佳。

干灰化的温度不宜超过500℃，时间不宜过长。用高型坩埚比扁形容器要好。若温度过高，有的元素如钾、硼会挥发损失，有的元素如铜、锰、锌会形成不溶于酸的硅酸盐。（2）湿灰化法湿灰化法的优点是不受容器的限制，一次可消化较多的样品，金属元素不宜损失，所需时间较短。缺点是易受来自器皿、仪器及所加试剂含有杂质等污染。特别是所用碱或酸不纯而用量大时，污染几率就高，对微量元素测定十分不利。

为了节约时间提高灰化效率，应因地制宜地选择适合的方法，即在同一待测液中可测定更多的元素。例如用H2SO4-H2O2湿灰化法制备待测液以测定常量元素氮、磷、钾、钙、镁等。采用HNO3-HClO4湿灰化法，用原子吸收分光光度计法可同时测定铜、锌、铁、锰等多种微量元素。

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